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2024年07月10日 10:13 来源：http://www.xwcbio.com/index.php?id=341
HRP分子中与酶活性无关的糖基被过碘酸钠氧化为醛基，再与抗体蛋白的氨基形成Schiff碱。为了防止酶蛋白的氨基与醛基发生自身偶联，在标记前先用2，4-二硝基氟苯(DNFB)封闭酶蛋白中残留的a-和e-氨基。酶与抗体的结合反应后，形成亚胺，不稳定，需再加入硼氢化钠还原成稳定的结合物。
(1) 取HRP 5mg溶于0.2mol/L，pH5.6醋酸盐缓冲液1ml中，加入1%DNFB无水乙醇溶液0.1ml，室温下轻微搅拌1h
(2) 加入新鲜配置的0.1mol/L NaIO4 0.5ml，此时溶液由原棕色变为墨绿色，置4℃放置30min，此时溶液由原棕色变为墨绿色；
(3) 加入2.5%乙二醇1ml， 室温下轻微搅拌1h，终止反应（此处也可以换成曲拉通X-100、吐温，CTAC等形成胶束，有几率合成二聚体，催化能力更强）；
(4) 加入待标记的抗体5-10mg， 用1.0mol/L， pH9.5 CB，调节pH值至9.0；
(5) 混匀，置4℃过夜
(6) 加入硼氢化钠溶液0.1ml，混匀，4℃放置3h；
(7) 对0.01mol/L，pH7.4 ，4℃透析过夜，换液3次；
(8) 3000r/min离心30min，去除沉淀物；
(9) 收集上清液即为酶标记抗体（加入30-50%的甘油保存）
HPR-Alkyne 辣根过氧化物酶-炔基
HPR-CHO 辣根过氧化物酶-醛基
HPE-NHS 辣根过氧化物酶-活化酯
HPR-Streptavidin 辣根过氧化物酶-链霉亲和素
β-Cyclodextrin-MAL β-环糊精-MAL
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Biotin-Salidroside 生物素标记红景天苷
HA-PBA 透明质酸-苯硼酸
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