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2024年07月10日 10:13 来源：http://www.xwcbio.com/
1、透析抗体
吸取2mg抗体到透析袋中，将抗体浓度调整为（4mg/mL），在20 mM的碳酸盐缓冲液（pH=9.5）中透析3h，每 1h 换液一次。如果原抗体中含有Tris、NH4+等游离氨基的试剂，必须透析除去。
2、氧化HRP
称量4mg HRP溶于0.2ml水中(20 mg/ml),称量 Nai04 37.9mg 溶于1.895ml 水中(20mg/ml)，HRP与 Nai04体积比 1:1 混合 (即各取200ul 混合，缓慢搅拌)，4 ℃避光静置反应30min，此时溶液为绿色。
3、终止氧化
加4ul乙二醇到40ul水中，混后全部加入氧化好的HRP中（缓慢搅拌）。4℃避光静置反应30min，此时溶液为褐色。
4、标记抗体
将终止氧化的 HRP溶液直接加入到透析好的抗体中混匀， 4 ℃避光反应4h。
5、终止标记
称取0.2mg的NaHB4，溶解于40 ul水中（现配现用），全部加入上述反应液中，4℃避光反应1h，每10min 摇一次。
6、纯化保存
20 mM PBS（pH=7.4）4℃避光透析过夜。然后在标记液中加入等体积的甘油，混匀后-20℃保存。纯化抗体-HRP标记物，也可选择 酶标纯化剂 进行纯化。经过验证通过酶标纯化剂 纯化，标记物测试性能更好，且纯化时间仅需要半个小时，当天完成标记操作，避免过夜透析纯化。详情可在公众号主页发送 酶标纯化剂进行了解。
HPR-Alkyne 辣根过氧化物酶-炔基
HPR-CHO 辣根过氧化物酶-醛基
HPE-NHS 辣根过氧化物酶-活化酯
HPR-Streptavidin 辣根过氧化物酶-链霉亲和素
β-Cyclodextrin-MAL β-环糊精-MAL
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Biotin-Salidroside 生物素标记红景天苷
HA-PBA 透明质酸-苯硼酸
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