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2024年07月10日 10:14 来源：http://www.xwcbio.com/
辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase,HRP）比活性高，稳定，分子量小，纯酶容易制备，所以最常用。HRP广泛分布于植物界，辣根中含量高，它是由无色的酶蛋白和棕色的铁卟啉结合而成的糖蛋白，糖含量18%。HRP由多个同工酶组成，分子量为40,000，等电点为pH3～9，酶催化的最适pH因供氢体不同而稍有差异，但多在pH5左右。酶溶于水和58%以下饱和度硫酸铵溶液。HRP的辅基和酶蛋白最大吸收光谱分别为403nm和275nm，一般以OD403nm /OD275nm的比值RZ（德文Reinheit Zahl）表示酶的纯度。高纯度的酶RZ值应在3.0左右（最高可达3.4）。RZ值越小，非酶蛋白就越多。（一般我们选择的时候，RZ值越大越好，同等条件下催化能力越强。）HRP的同工酶含糖量低的碱性(PI>11)同工酶。酶免疫试验中所使用的HRP，以PI为8.7～9.0的所谓“C”同工酶为主要组成成分，其他同工酶的活性则很低。“C”同工酶的共价结构由2个密切接近的区域组成，血红素基团则位于其间而成夹心结构，糖链以8个不同的部位结合于多肽。天然的酶所带的纯电荷极少；无游离的。—氨基，仅有2个可测出的组氨酸，6个赖氨酸似乎全被糖链外壳所遮盖。因此，HRP一般仅有1～2个可用于偶联的氨基。
这里所说的小分子指的是一些相对分子量小于10KD的化学结构式，一般采取竞争法，这些小分子半抗原一般都会被修饰带有羧基的碳链，这种情况下，就采用EDC、NHS偶联 ，但是由于HRP上面可用氨基只有1-2个。偶联效率相对比较低，所以需要选择RZ值高的HRP酶。如果能改造以下HRP酶，多修饰几个赖氨酸上去，偶联效率会提高很多，且偶联后不会改变HRP酶的空间构想。而且由于很多小分子的溶解性不一样，会用到DMSO，此时需要考虑溶剂含量对HRP酶活性的影响。
HPR-Alkyne 辣根过氧化物酶-炔基
HPR-CHO 辣根过氧化物酶-醛基
HPE-NHS 辣根过氧化物酶-活化酯
HPR-Streptavidin 辣根过氧化物酶-链霉亲和素
β-Cyclodextrin-MAL β-环糊精-MAL
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Biotin-Salidroside 生物素标记红景天苷
HA-PBA 透明质酸-苯硼酸
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