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2023年10月18日 18:38 来源：新维创生物科技（重庆）有限公司
1将50mg amino-dextran 溶于 500 L的 PBS 中，将 dextran 溶液转移到反应小管中，用试剂检测溶液 pH 值，以确保其为 pH - 7.4。
2根据染料/dextran标记摩尔比例，取准确体积的染料母液，补加DMF至250pL，与上述21步骤1中dextran 溶液混合，用移液器上下轻轻打动混匀，或者轻微超声 1-2秒，使染料完全溶解。常温下静置或翘班摇床轻微晃动(更佳)，避光反应 1-5小时，反应时间延长有助于提高标记效率，可标记过夜。注意: 对于蛋白质等敏感材料，反应中的有机溶剂体积比最好控制在 5%以下，不建议超过 10%，反应时间也可视情况缩短。
3利用透析法，除去未标记的游离染料分子。透析前需对反应样品进行预处理: 加入 15 m的 PBS 或者去离子水，反应会出现沉淀，该沉淀为游离的罗丹明染料，加水后因为水溶性不足而沉淀出来，而标记产物 Rhod-dextran 水溶性强不会析出。10,000g 高速离心后取上清加入透析袋中透析。为了快速的透出染料分子，请采用至少截留分子量 >10KDa的透析袋常温透析，最好每4个小时更换透析液，重复更换3次。随着透析袋内 DMF溶剂分子的透出，可能会有更多的游离罗丹明染料分子沉淀出来，离心取上清换透析袋再透析，直到样品没有沉淀、无染料透出为止。凝胶过滤法，比如除盐柱，也可以纯化标记产物，这个方法比较快捷，但是效率可能会不如透析法。
4在避光条件下，将纯化后的 dextran 样品储存在4℃冰箱，可至1个月。或者放-20℃冰箱，长期保存。
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