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2025年03月17日 11:14 来源：http://www.xwcbio.com/
中文名称：花菁染料CY3标记九聚精氨酸
英文名称：Cy3-Nonamer Arginine（Cy3-R9）
分子设计
R9骨架：由9个精氨酸残基通过肽键连接，N端为氨基，C端为游离羧酸，序列为RRRRRRRRR。
Cy3标记位点：通过赖氨酸侧链氨基或C端羧酸与Cy3的琥珀酰亚胺酯（NHS）反应，形成稳定酰胺键。
连接臂策略
短链连接：直接偶联Cy3-NHS至R9的ε-氨基，标记密度可控（每分子R9标记1-3个Cy3）。
长链修饰：引入聚乙二醇（PEG4）间隔臂，减少Cy3与R9的空间位阻，保留穿透活性。
同分异构体控制
区域选择性：通过调整反应pH（pH 8.5-9.0）优先标记赖氨酸残基，避免精氨酸胍基副反应。
固相合成法
Fmoc策略：在树脂上逐步偶联精氨酸，最后通过赖氨酸残基引入Cy3，总产率约60%-70%。
HPLC纯化：采用C18反相色谱柱，以乙腈/水（含0.1% TFA）梯度洗脱，分离未标记R9与Cy3-R9。
化学稳定性测试
血清稳定性：在10%胎牛血清中孵育24小时，Cy3-R9保留率>90%，胍基未发生显著水解。
光稳定性：在4℃避光保存下，荧光强度每月衰减<5%；暴露于日光下，半衰期约45分钟。
结构验证
质谱分析：MALDI-TOF质谱确认分子量（R9 1574.9 Da + Cy3 670.8 Da = 2245.7 Da，含连接臂）。
核磁共振（NMR）：¹H NMR谱显示Cy3芳环质子峰（δ 7.5-8.0 ppm），确认标记成功。
靶向基团偶联
肿瘤靶向：通过点击化学引入叶酸或RGD肽，构建Cy3-R9-靶向分子复合物。
核酸适配体：将AS1411适配体通过二硫键连接至Cy3-R9，实现核仁蛋白特异性识别。
刺激响应性设计
pH敏感键：在连接臂中引入腙键（-N=N-H-），在肿瘤酸性环境下断裂，释放游离Cy3-R9。
氧化还原响应：通过二硫键连接Cy3，在细胞内高GSH浓度下断裂，实现荧光信号激活。
多药联用平台
化疗药物共载：通过静电作用负载阿霉素（Dox），构建Cy3-R9/Dox纳米粒，实现荧光示踪与化疗协同。
基因-药物共递送：同时负载siRNA和PTX，构建“三位一体”递送系统。
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