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2023年10月07日 13:50 来源:新维创生物科技(重庆)有限公司
ICG荧光染料合成步骤及注意事项详解
ICG(Indocyanine Green,吲哚菁绿)是一种常见的荧光染料,其在生物学、医学和光学领域中具有广泛的应用价值。以下是ICG荧光染料合成步骤的详细说明。
材料准备
1. 原料:邻二氯苯(o-dichlorobenzene)、氯化铵、对甲苯胺、多聚磷酸、醋酸、氢氧化钠、乙醇胺、碳酸钾和对甲酚磺酸。
2. 仪器:分液漏斗、烧瓶、冷凝器、抽滤瓶、旋转蒸发仪、层析柱、恒温水浴锅、分光光度计。
合成步骤
1. 邻二氯苯与氯化铵反应
将邻二氯苯与氯化铵按照物质的量比1:2混合,加入烧瓶中,在搅拌下缓慢滴加对甲苯胺和多聚磷酸。反应温度控制在100-110℃,反应时间为4小时。然后加入醋酸,中和未反应的多聚磷酸,再加入氢氧化钠水溶液,调节pH至7-8,经抽滤、水洗得到产物。
2. 产物重结晶
将上述产物在乙醇胺和碳酸钾的作用下进行重结晶,然后以水为溶剂进行萃取。通过调节温度和pH值,反复进行结晶和萃取操作,直至获得纯度较高的产物。
3. 磺化反应
将上述产物与对甲酚磺酸在高温下进行磺化反应,控制反应温度在130-140℃,反应时间4小时。然后加入水和氢氧化钠溶液,调节pH至7-8,抽滤得到产物。
4. 分离和纯化
将上述产物溶于适量的氢氧化钠溶液中,用乙醚萃取,调节pH至7-8,抽滤得到固体产物。将产物用乙醇进行重结晶,再次抽滤得到较纯的ICG染料。最后用分光光度计测定ICG染料的纯度和浓度。
注意事项
1. 实验过程中要严格控制反应温度和时间,避免产生副反应。
2. 实验过程中需佩戴防护眼镜和手套,注意安全。
3. 使用有机溶剂时要避免明火,并在通风良好的环境下进行操作。
4. 实验结束后,需妥善处理废液,遵守环保要求。
通过以上步骤,可以制备出较高纯度的ICG荧光染料。这种染料在生物学、医学和光学领域具有广泛的应用价值,例如作为荧光探针标记生物分子、光学成像等。
新维创生物科技(重庆)有限公司
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