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2023年09月15日 13:39 来源：新维创生物科技（重庆）有限公司
1、做细胞免疫荧光大概提供多少抗体合适？
细胞免疫荧光实验我们需先进行预实验采用普通荧光显微镜进行观察，确认实验条件后再进行Confocal拍摄的正式实验。确认实验条件后再进行Confocal拍摄的正式实验。24孔板的细胞爬片在进行一抗37℃孵育时，一般加入200ul经BSA稀释的一抗，其稀释倍数需参考抗体说明书，如稀释倍数为1：100则每张爬片需要2ul（进行细胞免疫荧光的一抗稀释倍数要比WB的小）。注意提供的抗体量需满足预实验和正式实验所需的量。
2、怎样选择二抗标记的荧光？
二抗标记的荧光颜色的选择非常重要，要求在实验前根据现有材料和仪器的局限性设计好实验方案，一般我们进行三种颜色的标记工作。目前细胞核染料常用PI（红色）或DAPI（蓝色），如果细胞中还表达EGFP（绿色），则需要选用其他颜色的荧光素来标记目的蛋白，不得已的情况下采用颜色相近，后期也要用光谱拆分技术对图片进行处理（需专业人员进行，不建议采用相近颜色）。
新维创生物科技（重庆）有限公司
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