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2024年07月31日 14:44 来源：http://www.xwcbio.com/
TaqMan 荧光探针是一种寡核苷酸探针，荧光基团连接在探针的5'末端，而淬灭剂则在3'末端。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收; PCR扩增时, Tag酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。
1. 探针结构
双标记特性：Taqman探针在5’末端携带荧光基团（也称为报告基团），如FAM、TET、VIC、HEX等；在3’端携带淬灭基团，如TAMRA、BHQ等。这种双标记的设计使得探针在完整状态下，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收，从而不会产生荧光信号。
探针长度：一般建议探针长度在2535bp之间，但MGB探针（一种特殊类型的Taqman探针）的长度可能更短，通常在1325bp之间。探针的长度会影响其与目标序列的结合特异性和稳定性。
2. 标记原理
荧光共振能量转移（FRET）：当探针保持完整时，由于荧光共振能量转移的作用，淬灭基团能够吸收报告基团发射的荧光信号，从而抑制荧光的产生。这种机制确保了在没有目标序列存在时，探针不会产生背景荧光。
水解作用：在PCR扩增过程中，随着DNA聚合酶（如Taq酶）的延伸，当酶遇到与探针互补的目标序列时，其5’-3’外切酶活性会将探针切割成两部分，使得报告基团和淬灭基团分离。此时，报告基团不再受到淬灭基团的抑制，能够发出荧光信号。因此，每扩增一个DNA分子，就会有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成的同步。
3. 应用领域
病原体检测：Taqman探针法荧光定量PCR能够高效、准确地检测病原体，为疾病的早期诊断和治疗提供重要依据。
肿瘤相关基因突变检测：Taqman探针能够精确定量基因表达水平，并有效检测到基因的突变，为肿瘤的前期检测和伴随诊断提供技术支持。
基因多态性研究：通过设计不同荧光标记的探针，Taqman探针法可以实现多重检测，大大节省检测成本和时间，提高研究效率。
4. 注意事项
探针设计：探针的设计需要考虑其长度、Tm值、GC含量等因素，以确保其与目标序列的结合特异性和稳定性。同时，探针的5’端应避免使用碱基G，因为其可能对荧光有一定的淬灭作用。
储存条件：Taqman探针必须避光保存，以防止荧光基团的降解。干粉状态的探针可以在-80℃下长期保存，而溶解后的探针则应在-20℃下保存，并避免反复冻融。
实验操作：在使用Taqman探针进行PCR扩增时，需要注意实验操作的规范性和准确性，以避免非特异性扩增和污染等问题。
荧光素标记透明质酸 FITC-HA
CY5标记透明质酸 CY5-HA18k
吲哚菁绿标记透明质酸 ICG-HA
荧光素标记甲基丙烯酰化透明质酸 FITC-HAMA
CY3标记甲基丙烯酰化透明质酸 CY3-HAMA
荧光素标记海藻酸钠 FITC-Sodium alginate
CY5标记海藻酸钠 CY5-Sodium alginate
CY5-熊去氧胆酸 CY5-Ursodeoxycholic Acid
荧光素标记鞣花酸 CY2-Ellagic acid
荧光素标记胆固醇 FITC-Cholesterol
CY5标记胆固醇 CY5-Cholesterol
CY5.5标记胆固醇 CY5.5-Cholesterol
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CY5标记白藜芦醇 CY5-Resveratrol
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