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2024年05月06日 10:03 来源：新维创生物科技（重庆）有限公司
1.标记反应
1)取算好体积的新鲜配制的50μL FITC缓慢加入到1 mL蛋白样品溶液中，轻轻摇匀混合，然后短暂离心将样品收集在反应管底部。切忌剧烈混匀，防止蛋白样品变性失活。
2)将该反应小管置于避光处，在室温条件下轻轻摇晃孵育8 h，每隔30分钟，将反应小管轻轻颠倒几次，以充分混合两种反应物，提高标记效率。
3)加入5 M的NH4Cl至终浓度50 mM，4℃终止反应2 h。
2.蛋白纯化脱盐
以下方案以使用Sephadex G-25柱纯化染料蛋白偶联物为例。
1)按照生产说明书制备Sephadex G-25柱。
2)将反应混合物装入Sephadex G-25色谱柱顶部。
3)当样品运行到顶部树脂表面下方时，立即加入PBS(pH 7.2-7.4)。
4)向所需样品中加入更多的PBS(pH 7.2-7.4)，完成柱纯化。结合物含有所需要的染料-蛋白质缀合物的组分。
注意事项
1.FITC对光及湿度敏感。即用即配FITC溶液并丢弃未使用的部分。
2.低浓度的叠氮化钠(≤3 mM或0.02％)或硫柳汞(≤0.02 mM或0.01％)不会显著干扰蛋白标记；但是20-50％的甘油会降低标记效率。
3.避免使用含伯胺(例如Tris，甘氨酸)或铵离子的缓冲液，它们与待标记蛋白竞争反应。
异硫氰酸荧光素FITC FITC 3326-32-7
异硫氰酸荧光素-活性酯 FITC-NHS 117548-22-8
异硫氰酸荧光素-活性酯 5（6）-FAM-SE 117548-22-8
氨乙基(硫脲基荧光素)5-FITC-C2-NH2 75453-82-6
5-异硫氰酸荧光素乙二胺 5-FITC-C2-NH2 75453-82-6
5-羧基荧光素-马来酰亚胺 5-FAM-MAL 787632-00-2
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Fluorescein Isothiocyanate绿色荧光素衍生物FITC标记蛋白
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