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2024年02月07日 10:00 来源:新维创生物科技(重庆)有限公司
DAPI ,4',6-二脒基-2-苯基吲哚活细胞固定, 碘化丙啶,PI 染色剂
4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)是最常用的一种DNA 染色剂,其可与DNA 双螺旋的 A-T 富集区域相结合。如果 DAPI 附着到 DNA 上,其荧光强度将比游离状态要高。该染色剂受最大波长为358 nm的紫外光激发,其发射光谱非常宽,在461 nm 处达到峰值。此外,还可对弱荧光进行 RNA 结合检测。在这种情况下,发射波长将转移至 500 nm。DAPI 能够穿透整个细胞膜。因此,它可以用于固定活细胞。
Hoechst染料系列是 第二种被广泛使用的DNA 染色剂,Hoechst 33258、Hoechst 33342以及Hoechst 34580 均为双苯酰亚胺,可嵌入 A-T 富集区域,因此,该系列染料很少用到。与 DAPI 相似,这三种染色剂都可受最大发射波长为455 nm的紫外光激发,而未被结合的染色剂,其最大发射波长在 510–540 nm 之间。Hoechst 染色剂还具有细胞渗透性,因此可用于活细胞或已固定的细胞中。该染色剂与DAPI 的不同之处在于,它们的毒性较低。
碘化丙啶(PI)是一种不能透过细胞膜的 DNA 染色剂,无法进入完整的细胞中,因此,该染色剂常用于区分细胞群中的活细胞和死细胞。该染色剂与核酸结合后,最大激发波长为538 nm,最大发射波长为 617 nm。此外,碘化丙啶还是一种嵌入剂,但对于不同的碱基并不存在结合的差异性。PI 还可结合 RNA,同时无需改变自身的荧光特性,因此为了区分DNA 和 RNA,有必要使用适当的核酸酶。
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