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2024年01月04日 14:13 来源:新维创生物科技(重庆)有限公司
1、称取4.08mg PE溶于1mL浓度为0.1mmol/ml pH7.4的PBS中,溶解后,取出0.5mL,再加入浓度为2.65mg/ml的SPDP无水甲醇液10μL,SPDP/蛋白质物质的量比为10,22℃反应5min,过Sephadex G-50(1×17cm),用100mmol/L pH7.4的PBS平衡和洗脱;
2、将0.5mL浓度为2mg/ml的蛋白质和100mmol/L pH7.4的PBS液混合,把2.6μL上述SPDP甲醇液加入混合液中,使得SPDP:蛋白质=9:5,于22℃下放置40min后,再加如25μL pH7.4的二硫苏糖醇(DTT)缓冲液,于22℃下反应25min后,过Sephadex G-50,收集蛋白A峰;
3、将0.77mg/ml的PE和0.27mg/ml Protein A等量混合,于22℃下反应6h后,将混合物于4℃保存备用;
4、将以上两种PE标记制品溶于0.01mol/L pH7.4 PB(含有0.1mol/L DETA、1mol/L碘乙酰胺、1%BSA和0.1% NaN3)中,于0~4℃保存。
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