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2023年12月21日 11:49 来源：新维创生物科技（重庆）有限公司
吲哚菁绿标记蛋白质操作流程荧光染料ICG
一、实验原理
吲哚菁绿（ICG）是一种三碳菁类化合物，具有高荧光量子产率、激发波长范围宽、斯托克斯位移大、光稳定性好、与蛋白质结合后不易被蛋白酶水解等优点，因而被广泛应用于蛋白质的荧光标记。
本实验流程为：目的蛋白与吲哚菁绿反应生成荧光标记产物，通过PAGE或色谱等方法将产物分离，最后用荧光扫描仪检测产物荧光信号。以下仅供参考。
二、实验步骤
1. 目的蛋白的制备：根据实验需要，通过细胞培养或蛋白质抽提等方法获得所需目的蛋白。
2. 吲哚菁绿溶液的制备：将所需用量的吲哚菁绿溶于pH7.4的磷酸盐缓冲液（PBS）中，浓度为100μM。
3. 目的蛋白与吲哚菁绿反应：将目的蛋白与吲哚菁绿溶液混合，于室温下反应一定时间。
4. 分离纯化：通过PAGE或色谱等方法将目的蛋白与吲哚菁绿反应产物进行分离纯化。PAGE具体步骤如下：制备10%的分离胶，将样品在浓缩胶中充分混合之后上样后染色4小时色。液染脱色后观察目的蛋白是否被成功标记。
5. 荧光扫描：将目的蛋白从聚丙烯酰胺凝胶中切下，用荧光扫描仪进行扫描检测，记录荧光信号。
三、注意事项
1. 实验过程中要严格控制温度、pH值等反应条件，以确保反应的顺利。
2. 进行分离纯化时需注意操作细节，保证凝胶和蛋白质的质量。
3. 在实验过程中需避免荧光猝灭剂的污染，以确保检测结果的准确性。
4. 由于本方法涉及有毒物质，需在专业指导下进行实验操作，并注意安全防护。
四、质量控制
1. 在分离纯化过程中应设置对照实验，以验证目的蛋白是否被成功标记。例如：将未标记的目的蛋白与吲哚菁绿反应液混合后进行电泳或色谱分析，观察对照实验中是否存在非特异性荧光信号。
2. 通过电泳法、光谱法等多种检测方法，综合评估实验结果的可靠性。例如：利用光谱法测定吲哚菁绿的激发波长和发射波长，以验证其荧光性质；通过电泳法观察目的蛋白是否被成功标记；利用荧光扫描仪检测荧光信号强度等。
3.对实验数据进行统计分析处理，以得出更准确可靠的数据。例如：利用分析软件对电泳条带进行定量分析荧光信号强度；利用表格记录数据并计算荧光信号的相对强度等。
五、应用范围
本方法可用于研究蛋白质的结构功能与蛋白质相互作用以及蛋白质药物筛选等领例域。例如：将目的蛋白与药物分子作用后标记吲哚菁绿，通过荧光扫描仪检测荧光信号的变化，可研究药物分子对蛋白质的作用机制；将目的蛋白与特异性抗体结合后标记吲哚菁绿，通过荧光扫描仪检测荧光信号的变化，可应用于蛋白质免疫印迹等分析方法中；将多种蛋白质混合后标记吲哚菁绿，通过色谱或电泳等方法将各蛋白质分离，再利用荧光扫描仪检测各蛋白质的荧光信号强度，可研究蛋白质间的相互作用等。
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