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2023年12月21日 11:45 来源：新维创生物科技（重庆）有限公司
ICG-COOH是一种近红外荧光染料，可以用于标记蛋白质等生物分子。新维创生物整理的使用说明将介绍ICG-COOH标记蛋白质的实验步骤、注意事项和常见问题，供您参考。
一、实验步骤
1. 准备所需试剂和仪器：ICG-COOH、蛋白质溶液、pH试纸、离心管、离心机、荧光光谱仪等。确保试剂和仪器干燥、清洁，以避免对实验结果的影响。
2. 配制ICG-COOH溶液：将一定量的ICG-COOH粉末溶解在DMSO中，配制成一定浓度的ICG-COOH溶液。注意要使用磁力搅拌器搅拌，以避免ICG-COOH沉淀。
3. 加入蛋白质溶液：将待标记的蛋白质溶液加入到离心管中，根据需要加入适量的ICG-COOH溶液。
4. 反应：将混合液在恒温水浴中搅拌一定时间，使其充分反应。反应时间会因不同的蛋白质和ICG-COOH浓度而有所不同。
5. 纯化：反应结束后，将混合液进行离心，去除未反应的ICG-COOH。使用透析袋对上清液进行透析，进一步去除未反应的ICG-COOH和DMSO等小分子。
6. 冻干：将透析后的蛋白质溶液进行冻干处理，以得到干粉状标记物。
7. 荧光光谱仪检测：使用荧光光谱仪对标记后的蛋白质进行激发和发射光谱的检测，以评估标记效果。
二、注意事项
1. ICG-COOH具有较高的摩尔消光系数，因此在使用时应避免直接接触皮肤和眼睛。如有不慎接触，应立即用大量清水冲洗，并寻求医疗
帮助。
2. DMSO具有毒性，因此在使用时应尽量避免与其直接接触皮肤和吸入其蒸气。如有不慎接触，应立即用大量清水冲洗，并寻求医疗帮助。3. 在进行ICG-COOH标记蛋白质的反应过程中，应保持环境干燥、清洁，以避免水汽和杂质的干扰。
3. 用荧光光谱仪检测标记效果时，应注意激发和发射波长的选择，以及排除背景荧光的干扰。
5. 在冻干过程中，应保持温度和真空度的控制，以避免标记物变性。
三、常见性问题及解决方法
1. 标记效果不佳：这可能是由于反应时间、温度、pH值等参数不合适所导致的。解决方法是调整相关参数，如延长反应时间、提高温度、调整pH值等。
2. 在标记过程中或标记后，蛋白质可能会出现变性。这可能是由于ICG-COOH对蛋白质结构的破坏或冻干过程中温度过高所导致，解决方法是优化标记的条件和冻干过程，以减少对蛋白质结构的破坏。
3. 荧光淬灭：标记后的蛋白质在某些条件下可能会出现荧光淬灭。
这可能是由于在某些条件下不稳定或与环境中某些成分发生反应所导致的。解决方法是选择稳定的标记物和优化实验条件，以避免荧光淬灭的发生。
新维创生物科技（重庆）有限公司
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