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2023年12月14日 15:18 来源:新维创生物科技(重庆)有限公司
SA-HPR链霉亲和素标记辣根过氧化物酶Streptavidin-HPR
链霉亲和素(SA)因表面所带正电荷少,且不含糖基,在实验中的非特异性结合远低于亲和素,因此目前以链霉亲和素标记的酶结合物更为常用。
1).HRP-SA结合物的制备 采用过碘酸钠直接标记:反应在4℃进行,先在HRP中加入NaIO4,然后直接加链霉亲和素溶液混匀,再用碳酸盐缓冲液(PH9.0)透析后,用KBH4终止反应:加饱和硫酸铵沉淀,离心后弃上清液,再用PBS复溶沉淀即得HRP-SA结合物.
2).SA-生物素化HRP复合物的制备 按BNHS标记抗体法制备生物素化HRP( HRP-B),再将HRP-B适当稀释后,加入等体积的链霉亲和素溶液(HRP-B与SA浓度比约1:4)反应,即可制得SA-生物素化酶复合物(streptavidin-biotin-peroxidaes complex,SABC).
3).AP-SA结合物的制备 采用戊二醛二步法:先用饱和硫酸铵沉淀碱性磷酸酶,离心后加过量戊二醛溶液复溶碱性磷酸酶沉诧.戊二醛的一个醛基即与碱性磷酸醇的氨基结合:充分透析除去未结合戊二醛后,加链霉亲和素与结合了碱性磷酸酶的戊二醛另一个醛基结合,用赖氨酸终止反应,离心后留取含AP-SA结合物上清液备用。
新维创生物科技(重庆)有限公司
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