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2023年12月09日 09:40 来源:新维创生物科技(重庆)有限公司
FITC,常用抗体、蛋白、多肽标记荧光试剂❗
CAS#:3326-32-7
中文名:异硫氰酸荧光素
英文名:Flourescein iso-thiocyanate
分子式:C21H11NO5S
分子量:389.38
外观:黄色粉末
FITC能和各种抗体蛋白结合,结合后的抗体不丧失与一定抗原结合的特异性,并在碱性溶液中具有强烈的黄绿色荧光。通过在荧光显微镜下观察或流式细胞仪分析可对相应抗原进行定性、定位或定量的检测。
FITC标记抗体流程:
1)将待交联的蛋白(浓度1mg/mL)对交联反应液透析三次4℃,至pH=9.0。交联反应液配制方法:7.56g NaHCO3,1.06g Na2CO3,7.36g NaCl,加水定容至1 L。
2)将FITC溶于DMSO中,浓度为1mg/mL。每次交联使用的FITC均应新鲜配制,避光。
3)按P:F(蛋白质:FITC)=1mg:150μg 的比例将FITC缓慢加入于抗体溶液中,边加边轻轻晃动使其与抗体混合均匀,暗处4℃反应8h。
4)加入5mol/L的NH4Cl至终浓度50mmol/L,4℃终止反应2h。
5)将交联物在PBS中透析四次以上,至透析液清亮。
6)交联物的鉴定
蛋白浓度(mg/mL) = [ A280– 0.31×A495 ] / 1.4
F/P比例: 3.1×A495 / [A280 – 0.31×A495 ],该值应介于2.5~6.5之间。
7)FITC交联的蛋白应置于pH 7.4的磷酸盐缓冲液中,加入0.1% NaN3、1% BSA,4℃避光保存。
以上仅供参考,具体流程视实验情况而定,可提供荧光标记多肽/蛋白/抗体现货供应 了解更多优惠请拨打销售热线17725097785
新维创生物科技(重庆)有限公司
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