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2023年11月20日 11:15 来源：新维创生物科技（重庆）有限公司
荧光染料FITC是如何标记蛋白质的？以下是相应操作流程：
1)制备溶于0.1m碳酸钠缓冲液(pH9.0)的待标蛋白溶液，浓度≥2mg/ml。
2)将FITC溶解在无水DMSO中，制成1mg/ml溶液。
3)将50μFITC溶液添加到1ml蛋白溶液中，可根据每次5μ量轻轻搅拌蛋白溶液。
4)加入所需FITC后，反应液在4°C避光孵化8h。
5)加入NH4CI，使其终浓度达到50mm，4°C终止反应2h。
6)加入二甲苯绿至0.1%，甘油至5%。
7)通过对尺寸和孔径合适的凝胶过滤层进行分析和分离，排除未结合的FITC，分离范围为2000-50000(球蛋白如抗体)。凝胶柱平衡后，从柱顶注入上述反应混合波。打开凝胶柱，流入柱床后加入PBS缓冲液。此时，可形成两条带：
a.快速移动带，即FITC-蛋白质标记物，首先被洗掉，通常在室内光下可见;
b.慢速移动带，即FITC和二=甲苯绿，没有蛋白质结合。仅在PBS缓冲液清洗后就被洗掉了。
8)将上述偶联物储存在4°C中，加入0.1%(w/v)叠氮化钠作为防腐剂。如果蛋白质浓度低(1mg/ml)，可以加入1%BSA作为蛋白质稳定剂。
9)标记物中荧光素与蛋白质的比值(F/P)可通过测量495nm和280nm处的吸光值来识别，F/P应位于0.3-1.0。如果比例小，信号太低，如果比例高，背景太高。
新维创生物科技（重庆）有限公司
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