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2023年11月17日 16:33 来源：新维创生物科技（重庆）有限公司
FITC（异硫氰酸荧光素）是一种荧光素衍生物。可作为荧光探针应用于制备分子生物学或糖类聚合物的结合物分子，FITC常用作蛋白质或多糖的不同底物的标记试剂。
当FITC在碱性溶液中蛋白反应时，主要是蛋白质上赖氨酸的ε-氨基与荧光素的硫碳胺键(thiocarbmide)结合（形成硫碳氨基键），形成FITC-蛋白质结合物，即荧光抗体或荧光结合物。
FITC标记蛋白方法：
1制备溶于0.1M碳酸钠缓冲液( pH 9.0 )的待标记蛋白溶液,浓度≥2mg/ml.
2溶解FITC于无水DMSO配制成1mg/ml的溶液。
3对于1ml蛋白溶液加入50μFITC溶液,可按照每次5μ的量边加边轻轻搅拌蛋白溶液;
4待所需FITC加入完毕,将反应液于4°C避光孵育8h ;
5加入NH4CI使其终浓度至50mM , 4°C终止反应2h ;
6加入二甲苯青至浓度0.1% ,甘油至浓度5% ;
7通过大小孔径合适的凝胶过滤层析分离排除未被结合的FITC ,分离范围在20,000至50,000 (球蛋白例如抗体)。待凝胶柱平衡后,将以上反应混合波从柱顶注入，打开凝胶柱,待其全部流入柱床后,加入PBS缓冲液。
8 于4°C避光储存上述偶联物,加入0.1% ( w/v )叠氮化钠作为-种防腐剂。若蛋白浓度较低( < 1mg/ml) , 可加入1%BSA作为-种蛋白稳定剂。
9标记物中荧光素和蛋白的比值( F/P )可通过测定495nm和280nm处的吸光值来鉴定, F/P应位于0.3-1.0。小于该比例则信号太低，高于该比例则背景太高。
新维创生物科技（重庆）有限公司
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