关注我们，为您提供时实资讯
2025年09月16日 10:48 来源：
CY5-表儿茶素（CY5-(-)-Epicatechin）是一种将天然黄烷醇类化合物表儿茶素与近红外荧光染料CY5通过化学偶联形成的荧光标记探针，广泛应用于抗氧化机制研究、细胞摄取追踪、体内分布成像等领域。其制备方法主要基于生物共轭化学（Bioconjugation Chemistry），旨在在保留表儿茶素生物活性的同时，实现高效、稳定的荧光标记。以下是几种常见的制备方法：
1. NHS酯偶联法（最常用）
这是目前最成熟、应用最广泛的CY5标记方法。
原理：
利用CY5染料的N-羟基琥珀酰亚胺酯（CY5-NHS ester）与表儿茶素分子中的游离氨基发生亲核反应，形成稳定的酰胺键。但表儿茶素本身不含氨基，因此通常需要先对表儿茶素进行氨基修饰。
步骤简述：
氨基化修饰：将表儿茶素的酚羟基通过保护-取代策略引入一个含有氨基的连接臂（linker），例如使用氨基聚乙二醇衍生物（如NH₂-PEG-COOH）通过酯化或醚化反应连接到表儿茶素的特定羟基上，生成“氨基-表儿茶素”中间体。
偶联反应：将氨基-表儿茶素与CY5-NHS在无水DMSO或DMF中混合，在弱碱性缓冲液（如pH 8.0–8.5的碳酸氢钠缓冲液）中避光反应2–4小时。
纯化：反应结束后，通过柱层析（如Sephadex G-25）、反相HPLC或透析去除未反应的CY5和副产物，获得高纯度的CY5-表儿茶素。
鉴定：通过质谱（MS）、核磁共振（NMR）和紫外-可见吸收光谱确认结构与标记效率。
优点：反应条件温和、偶联效率高、产物稳定。
缺点：需预先修饰表儿茶素，步骤较多。
2. 点击化学法（Click Chemistry）
适用于需要长链连接或空间位阻控制的场景。
原理：
采用铜催化叠氮-炔环加成反应（CuAAC），即“点击化学”。需分别对CY5和表儿茶素进行功能化修饰。
步骤简述：
前体制备：
将表儿茶素修饰上叠氮基团（-N₃），例如通过酯化反应连接含叠氮的 linker。
使用炔基修饰的CY5（CY5-Alkyne）或反之。
点击反应：在Cu(I)催化剂（如CuSO₄ + 抗坏血酸钠）存在下，叠氮与炔基在室温下快速环加成，生成稳定的三唑环连接结构。
纯化与鉴定：同上，使用HPLC纯化，MS/NMR验证。
优点：反应高效、特异性强、生物正交性好，适合复杂体系。
缺点：需合成双功能前体，成本较高；铜催化剂可能对某些生物样品有毒性。
3. 马来酰亚胺-巯基偶联法
适用于引入硫醇基的间接标记。
原理：
利用CY5-马来酰亚胺与巯基（-SH）的特异性反应。表儿茶素无巯基，需先引入半胱氨酸-like结构或使用含巯基的连接臂。
步骤：
将表儿茶素与含巯基的PEG linker（如HS-PEG-COOH）偶联，生成“巯基-表儿茶素”。
与CY5-Maleimide在pH 6.5–7.5条件下避光反应1–2小时。
纯化后获得目标产物。
优点：反应速度快、选择性高。
缺点：巯基易氧化，操作需严格控氧。
4. 直接酯化/醚化法（较少用）
将CY5羧酸衍生物与表儿茶素的酚羟基直接缩合。
方法：
使用DCC/NHS或EDC/NHS活化CY5-COOH，然后与表儿茶素的酚羟基反应形成酯键。
需控制反应条件避免多取代。
缺点：酯键在体内易被酯酶水解，稳定性较差，且可能影响表儿茶素的抗氧化活性。
建议：对于科研用途，推荐采用NHS酯偶联法结合氨基修饰路线，技术成熟、重复性好。若需更高特异性或用于活体标记，可考虑点击化学法。实际制备应在避光、惰性气氛下进行，以保护CY5染料和多酚结构。
日期：2025-09-16
[荧光探针]6-羧基-X-罗丹明琥珀酰亚胺酯，6-ROX NHS，高活性荧光探针的修饰特点
日期：2025-09-16
[新维创]四甲基若丹明B-异氰酸酯，荧光素-四甲基若丹明，FITC和RB四甲基若丹明，应用优势与局限性
新维创生物科技（重庆）有限公司
2023.06.05
Mannose-CY5甘露糖红色荧光标记多糖类化合物
2024.06.12
FITC-甘露糖Mannose-FITC异硫氰酸荧光素甘露糖荧光标记的优点
2024.05.28
DBCO-CY5与DBCO-CY7化学结构及性质差别/sulfo-cy5-dbco/sulfo-cy7-dbco
2024.05.27
DBCO-CY5荧光标记化合物点击化学反应的特性CY5-二苯并环辛炔2182601-71-2
2024.05.27
Cy5标记胆固醇在生物医学研究中具有广泛的应用领域醇Cholesterol-Cy5
2024.05.23
近红外荧光染料CY5标记胆固醇Cholesterol-Cy5针化合物
2024.05.23
Cholesterol-CY5胆固醇红色而荧光标记甾醇CY5羧基1032678-07-1
2024.05.23
新维创生物（重庆）有限公司 FITC-丝素蛋白绿色荧光标记，Silk fibroin,CAS:96690-41-4 ,Silk fibroin-FITC…
2024.05.18
重庆新维创生物 CY5-MAL马来酰亚胺的光学性质CY5红色荧光染料修饰1437796-65-0
2024.05.18
磺酸基CY5马来酰亚胺巯基反应性荧光染料Sulfo-CY5-MAL
2024.05.13
Sulfo-CY5-MAL︱2242791-82-6︱磺酸基团荧光染料衍生物在生物成像、化学分析的应用…
2024.05.13
阿霉素荧光修饰RB-Doxorubicin罗丹明标记阿霉素药物输送体内示踪
2024.05.11
赖氨酸FITC标记FITC-D-LYS荧光素标记赖氨酸绿色荧光异硫氰酸荧光素生物学应用…
2024.05.11
D-LYS-FITC荧光素标记赖氨酸 多肽标记绿色荧光异硫氰酸荧光素的应用
2024.05.11
FITC-D-LYS荧光素标记赖氨酸绿色荧光异硫氰酸荧光素修饰多肽
2024.05.11
CY5-amine/Cy5-NH2/氨基CY5的荧光特性1807529-70-9 Sulfo-CY5-amine磺酸基
2024.05.10
CY5-amine/Cy5-NH2/氨基CY5的化学性质近红外荧光染料CY5-NH2 1807529-70-9
2024.05.10
水溶性花菁染料Cy5标记链霉亲和素streptavidin
2023.11.24
水溶性CY5标记叠氮的原理
2023.11.24
荧光探针Sulfo-CY5-azide水溶性叠氮化物
2023.11.24
在氢谱中氨基为什么有两个峰？
2023.07.13
新维创生物汇总HNMR（核磁氢谱）化学位移0-14代表性官能团
2023.07.07
常用于核磁共振的氘代化学品
2023.07.03
NMR所需样品量和内标总结
2023.06.28
什么是核磁共振二维谱(2D NMR)？
2023.06.27
新维创生物利用核磁共振波谱仪分析聚合物结构
2023.06.27
你知道固体核磁和液体和磁的区别吗？
2023.06.20
