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2025年12月16日 11:09 来源:
CY5-刀豆蛋白A(英文名称:Cyanine5-Concanavalin A,简称CY5-ConA)是一种由近红外荧光染料CY5与植物凝集素刀豆蛋白A(Concanavalin A,ConA)通过共价偶联形成的功能化生物探针。其中,刀豆蛋白A是从刀豆(Canavalia ensiformis)种子中提取的四聚体糖蛋白,分子量约102 kDa,每个亚基含237个氨基酸残基,结合一个Ca²⁺和一个Mn²⁺,其核心功能是通过特异性识别α-D-甘露糖和α-D-葡萄糖残基,与糖蛋白、细胞膜糖链及病原体表面多糖结合。CY5则是一种花菁类荧光染料,最大激发波长649 nm、发射波长670-710 nm,具有高光稳定性和低背景干扰特性,其共轭多甲川链结构赋予其近红外荧光特性。
物理化学特性与实验适配性
CY5-ConA的构建通过化学修饰保留了ConA的糖结合活性(每个ConA分子可结合2-8个CY5分子),同时赋予其荧光示踪能力。其物理特性包括:
1. 光谱兼容性:CY5的长波长发射(670-710 nm)可穿透深层组织,减少生物样本自发荧光干扰,适用于活体成像;
2. 化学稳定性:ConA在pH 6.0-8.0范围内稳定,CY5通过NHS酯与ConA的赖氨酸氨基共价结合,形成稳定的酰胺键,确保在复杂生物环境中(如血清、细胞培养基)不脱落;
3. 生物活性保留:标记后的CY5-ConA仍能以亚微摩尔级浓度凝集红细胞,并特异性结合高尔基体糖蛋白,证明其糖识别功能未受显著影响。
多领域应用场景
1. 细胞生物学:用于实时追踪细胞膜糖基化动态。例如,通过共聚焦显微镜观察CY5-ConA与乳腺癌细胞表面糖链的结合,揭示肿瘤细胞糖基化水平与转移潜能的相关性;
2. 纳米医学:作为靶向配体修饰脂质体或聚合物纳米颗粒。例如,将CY5-ConA偶联至载药纳米粒表面,通过糖-受体相互作用实现肝癌细胞特异性摄取,荧光信号可定量评估递送效率;
3. 病理诊断:结合免疫组化技术,CY5-ConA可标记组织切片中的糖萼结构,辅助区分正常垂体细胞与分泌ACTH的腺瘤细胞;
4. 药物开发:用于筛选糖基化抑制剂。例如,通过监测CY5-ConA与内质网糖蛋白的结合变化,评估化合物对糖基化酶活性的抑制效果。
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