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2026年01月13日 13:58 来源：
乳酸氧化酶（Lactate Oxidase，LOx，EC 1.1.3.2）是一种含黄素单核苷酸（FMN）的同源四聚体氧化还原酶，属于黄素蛋白家族。其系统名称为“(S)-乳酸:氧气 2-氧化还原酶（脱羧）”，别名包括L-乳酸单加氧酶、乳酸氧化脱羧酶等。该酶专一性催化L-乳酸氧化为丙酮酸，同时生成过氧化氢（H₂O₂），反应式为：
L-乳酸 + O₂ → 丙酮酸 + H₂O₂
其分子量约为30 kDa，活性中心由β-桶结构域与FMN辅因子结合，残基190-220形成“盖状结构”覆盖底物结合位点。
罗丹明标记（RB-LOx）的化学修饰
罗丹明B（Rhodamine B）是一种近红外荧光染料，通过共价键与乳酸氧化酶的赖氨酸残基结合，形成RB-LOx复合物。修饰后的酶保留原有催化活性，同时赋予荧光特性，激发波长为555 nm，发射波长为580 nm，适用于活体成像与微流控检测。
功能与应用
1. 临床诊断：RB-LOx是乳酸检测试剂盒的核心成分。在自动化生化分析仪中，LOx催化乳酸生成H₂O₂，后者与4-氨基安替比林和酚类底物反应生成红色醌亚胺染料，通过吸光度定量乳酸浓度。
2. 生物传感：固定化RB-LOx电极通过检测H₂O₂的氧化电流实现乳酸实时监测，应用于血气分析仪与运动医学手环。
3. 肿瘤研究：乳酸作为肿瘤微环境标志物，RB-LOx荧光探针可追踪活细胞内乳酸动态变化，揭示免疫逃逸机制。
实验开发细节
· 标记条件：pH 7.4磷酸盐缓冲液中，罗丹明B与LOx以10:1摩尔比反应，4℃避光孵育12小时。
· 纯化：通过凝胶过滤层析（Superdex 200）分离未结合染料，纯度＞95%。
· 稳定性：4℃保存30天后活性保留85%，荧光强度下降＜10%。
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