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2025年12月10日 11:20 来源：
CY5-二苯环辛炔-鸡卵白蛋白（Cyanine5-Dibenzocyclooctyne-Ovalbumin，简称Cy5-DBCO-OVA）是一种通过化学共价键将近红外荧光染料CY5、无铜点击化学反应基团二苯环辛炔（DBCO）与模型抗原鸡卵白蛋白（OVA）结合的复合物。其设计融合了荧光追踪、靶向标记与生物相容性三大核心功能，广泛应用于生物医学研究领域。
1. 分子组成：
1. CY5：一种长波长花青素类荧光染料，吸收峰约650 nm，发射峰约670 nm，具有高量子产率与光稳定性，可穿透组织实现深层成像。
2. DBCO：一种张力增强的环烯炔基团，通过无铜点击化学（SPAAC）与叠氮基（-N₃）高效反应，形成稳定三唑键，反应条件温和且无需催化剂。
3. OVA：分子量约43 kDa的球状蛋白，来源于鸡蛋清，因其免疫原性强、结构稳定，常作为抗原递呈研究的模型分子。
2. 物理化学特性：
1. 溶解性：通过聚乙二醇（PEG）链修饰的CY5-DBCO-OVA可显著提升水溶性，减少非特异性吸附，同时保持荧光性能。
2. 稳定性：在pH 4-10范围内稳定，适合生理环境应用；储存于-20℃可长期保持活性。
3. 荧光特性：CY5的近红外发射波长（670 nm）可降低生物组织自发荧光干扰，提升成像信噪比。
抗原递呈与免疫研究：
OVA作为经典模型抗原，通过CY5标记后，可实时追踪抗原在体内的分布、代谢及被免疫细胞（如树突状细胞）摄取的过程。例如，在疫苗开发中，CY5-DBCO-OVA可用于评估抗原递呈效率与淋巴结靶向性。
活体成像与药物追踪：
CY5的近红外荧光特性支持小动物活体成像，可监测OVA载体或药物递送系统的体内行为，如靶向肿瘤组织的富集效率与释放动力学。
多重荧光标记与共定位分析：
DBCO基团可与叠氮化修饰的其他荧光染料（如Cy3、FITC）组合，实现多色标记，用于分析细胞内不同分子的空间关系。
实验反应条件优化：
CY5-DBCO与叠氮化物的反应摩尔比为1.2-1.5:1，室温孵育30-120分钟即可完成偶联；反应后可通过透析或超滤去除游离染料，确保标记纯度。
1. 纳米载体修饰：
CY5-DBCO-OVA可与叠氮化脂质体或聚合物纳米颗粒结合，构建荧光纳米探针，用于肿瘤靶向成像或协同治疗。
2. 高通量筛选：
结合流式细胞术或荧光显微镜，可快速筛选OVA特异性抗体或T细胞受体（TCR）的亲和力与功能。
3. 组织工程与再生医学：
标记的OVA可作为支架材料的功能化配体，引导干细胞分化或监测组织修复过程。
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