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2025年03月17日 11:16 来源：http://www.xwcbio.com/
中文名称：花菁染料CY3链霉亲和素
英文名称：Cy3-Streptavidin（Cy3-SA）
标记化学原理
反应机制：Cy3的琥珀酰亚胺酯（NHS）基团与SA表面赖氨酸的ε-氨基发生亲核取代，形成稳定酰胺键。
位点选择性：通过控制反应pH（pH 8.5-9.0）和摩尔比（Cy3-NHS:SA=5:1），实现定向标记。
连接臂设计
短链标记：直接偶联Cy3-NHS至SA，标记密度可控，但可能轻微影响生物素结合位点。
长链修饰：引入聚乙二醇（PEG4）间隔臂，减少空间位阻，保留SA的完整结合能力。
同分异构体控制
区域选择性：通过赖氨酸残基保护策略，避免Cy3标记在生物素结合口袋附近。
标记流程
缓冲体系：在碳酸盐缓冲液（pH 9.0）中进行标记反应，4℃避光震荡12小时。
终止反应：加入甘氨酸（50 mM）淬灭未反应的NHS基团。
纯化方法
凝胶过滤色谱：使用Superdex 75柱分离游离Cy3与Cy3-SA，回收率约75%。
HPLC验证：反相色谱（C4柱）确认无游离染料残留。
化学稳定性测试
水解抗性：在含1 M NaCl的PBS中孵育7天，Cy3脱落率<5%。
光漂白抗性：氙灯连续照射（100 mW/cm²）下，荧光强度衰减至50%需约45分钟。
多色标记策略
正交标记：结合Cy5或Alexa Fluor 647进行双色标记，构建多通道检测体系。
靶向分子偶联
生物素-亲和素系统：通过生物素化抗体或适配体，将Cy3-SA间接靶向至细胞表面受体。
刺激响应性设计
光敏连接臂：引入邻硝基苄基基团，实现紫外光触发Cy3释放。
pH敏感键：通过腙键连接Cy3，在肿瘤酸性微环境下断裂，激活荧光信号。
标记均一性：需优化反应条件以减少批次间差异，目标标记比误差<10%。
成本问题：开发更经济的标记方法，如酶促标记或连续流动合成技术。
体内应用：通过PEG化或白蛋白修饰延长Cy3-SA的血液循环时间，减少肝肾清除。
日期：2025-03-17
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