一、产品基础信息

• 中文名称：利塞膦酸-CY2

• 英文名称：Risedronic acid-CY2

• 常用缩写·别名：利塞膦酸绿色荧光标记物／双膦酸-CY2

• 规格：10mg/100mg/500mg

• 溶剂：水、PBS、DMSO；水相溶解性好

• 性状：橙黄色至红色固体（示意，具体以COA为准）

二、一个分子上的两类负电荷

利塞膦酸的结构核心是两个膦酸基共用一个碳，该碳上另连羟基与吡啶环。膦酸基在水中分两级电离，中性 pH 下每个膦酸基带一到两个负电，吡啶环在中性附近基本不电离，偏酸时反而带一个正电。

CY2 属于带磺酸基的花菁染料，两个磺酸基在 pH 1 至 12 的范围内都保持解离，因此染料的负电是固定的，不随缓冲液 pH 明显变化。

两者接在一起，整个分子在中性条件下带四到五个负电。这个数字在双膦酸类标记物里偏高，它决定了后续一系列行为：在低离子强度下容易被带正电的表面抓住，在含多价阳离子的体系里容易发生桥连，在电泳与离子交换中也走得更快。

三、带正电表面的吸附

多价阴离子对带正电表面有较强的亲和。常见的带正电表面对这类分子而言并不可忽略：氨基化的玻片与盖玻片、部分经过表面处理的塑料、带阳离子添加剂的滤膜，以及清洗残留的阳离子表面活性剂。

吸附量随离子强度下降而上升。离子强度低时，负电荷周围的离子氛稀薄，静电吸引没有被屏蔽，分子贴到表面后不易脱开。实际表现是：工作液配在低盐缓冲液里，容器壁附着一层颜色，冲洗多次仍在；过一遍滤膜，滤膜染上颜色，滤液信号偏低。

浓度越稀，损失比例越大。这一点容易被忽略：同一批产物，配 10 μmol/L 时回收率可能还有八成，配 0.5 μmol/L 时只剩一半，而两次操作的差别仅仅是浓度。做标准曲线时若处于下端的低浓度点用低盐缓冲液配制，曲线会向下弯，看上去像检测限问题，实际是吸附。

pH 还会改变分子自身的电荷。膦酸基在偏酸条件下逐步质子化，负电减少，表面吸附随之减弱；同时与含钙表面的结合也会减弱，因为参与配位的氧被质子占据。吸附与结合在这一点上同向变化，很难只压住其中一个。若实验需要在低 pH 下操作，宁可提高离子强度来压制吸附，也不要用降低 pH 的办法，后者的代价落在结合能力上。

四、把吸附压下去的条件

工作液用含 150 mmol/L 氯化钠的缓冲液配制，离子强度足以把大部分表面吸附屏蔽掉。这是成本较低的一项改动。

容器选择上，玻璃适合短时间操作但不适合过夜存放；聚丙烯比聚苯乙烯好，低吸附型号更好。滤膜选聚偏二氟乙烯材质，尼龙膜带正电，不适合这类分子。

已经吸附的器皿可以用含 1 mol/L 氯化钠与少量非离子去垢剂的溶液浸泡，多数情况下能洗下来。浸泡时间不必长，但浓度要够，靠延长浸泡时间代替提高盐浓度，效果有限。

需要提醒的是，提高盐浓度只是压制吸附，不改变分子本身的电荷。若实验设计依赖静电作用，例如让标记物吸附到带正电的材料表面，那么低盐条件反而是必要的，此时应当把吸附当作实验对象而不是干扰。

五、浓度核对的必要性

按称重折算浓度，在这类产物上偏差偏大，原因有两处：吸附损失使实际投入量低于标称值；产物本身的含水量与残留盐分随批次变化。

较稳妥的做法是用吸收光谱核对。CY2 在 490 nm 附近有明确的吸收峰，用同一批产物、同一缓冲液建立标准曲线，再反算工作液的实际浓度。这样得到的是溶液中真正参与实验的量，与称重折算值往往差一成以上。

混合体系中还要做一次换算。若标记物加在含蛋白或其他大分子的缓冲液里，直接测 490 nm 的吸收会被体系浊度干扰，读数偏高。此时应做一份组成相同但不含标记物的空白，两者相减后再换算浓度。空白不能省，因为这类体系的浊度随时间变化，用配制前的空白读数去扣，偏差仍然存在，空白要与样品同时处理。

六、Q&A

Q：为什么同一批产物在玻璃瓶和塑料管里颜色深浅不同？

瓶壁吸附量不同。玻璃表面的硅羟基在部分条件下带负电，对这类多价阴离子排斥较强，吸附反而少；塑料表面常带正电或疏水，吸附更多。视觉上的深浅差别，反映的是溶液中剩余浓度的差别，不是产物本身有变化。

Q：加氯化钠会不会影响后续与含钙表面的结合？

会，而且影响明确。盐浓度升高会屏蔽静电作用，也会与钙离子竞争，使结合量下降。若实验目的是考察与含钙表面的结合，应在结合步骤用低盐条件，只在配制与存放阶段用较高盐浓度，两步分开处理。

Q：CY2 通道的检测下限比近红外高，是不是必须换染料？

不一定。检测下限的差别主要来自样本自身的本底，纯缓冲液体系里两者的差距有限。若样本本底高，改用长波标记物更省事；若样本干净、只是需要低成本筛选，CY2 通道足够用，配合未标记对照即可。

本产品仅供科研使用，禁止用于任何人体实验。

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