一、产品基础信息

• 中文名称：邻苯二甲醛-CY7

• 英文名称：o-Phthalaldehyde-CY7（OPA-CY7）

• 常用缩写/别名：OPA-CY7、邻苯二甲醛近红外偶联物、异吲哚型荧光标记物

• 规格：10mg/100mg/500mg

• 溶剂：建议先用少量无水 DMSO 或 DMF 溶解，再用缓冲液稀释

• 性状：深绿色至蓝绿色粉末（示意，具体以 COA 为准）

二、作用原理

邻苯二甲醛是苯环上相邻两个位点各带一个醛基的小分子，两个醛基之间的间距约 0.25 nm。这一几何关系决定了它的反应特征：单独与伯胺接触时，只生成一个不稳定的半缩胺，很快水解回原料；只有体系中同时存在巯基，两条反应路径才闭合，生成稳定的异吲哚衍生物。

异吲哚的形成分三步：一分子伯胺先与一个醛基缩合成亚胺，巯基随后加成到另一个醛基上，随后环化形成含氮五元环。整个反应在 pH 9.0 至 10.0 之间速率较高，时间尺度在数十秒到数分钟，属于快速衍生化。

CY7 是七甲川花菁染料，吸收约 750 nm、发射约 770 nm，位于近红外窗口，样本自发荧光在该波段很低。花菁骨架是较长的共轭多甲川链，疏水性强，在水相中容易相互靠近形成聚集体，表现为吸收峰蓝移与荧光下降。

两者结合之后，矛盾出现在稳定性上。异吲哚环对水解与氧化都敏感：环上的碳氮键在酸性条件下易断裂，在含氧体系中还会被氧化成醌式结构，两种情形都伴随荧光消失。CY7 那一端则要求避氧避强光。因此这类标记物的有效期短于常规酰胺键偶联物，保存与使用的时间窗都需要压缩。

三、常见避坑

漏加巯基导致标记失败。 这是常见的问题。体系中没有巯基时，OPA 与伯胺只能生成半缩胺，荧光信号弱且不稳定，容易被判为标记度低。补加巯基后信号恢复，说明此前的失败源于成环路径未闭合。

把信号衰减归因于染料。 异吲哚水解与 CY7 漂白在表现上都使信号下降，区分办法不同：水解引起的下降在补加巯基并提高 pH 后部分恢复，漂白引起的下降不可逆。

缓冲液中的伯胺污染。 三羟甲基氨基甲烷、甘氨酸、铵离子都带伯胺，会与待标记物竞争 OPA。体系中含有这类成分时，需先透析去除，否则标记度明显偏低。

高浓度下的聚集。 CY7 疏水，浓度高时形成聚集体，吸收峰蓝移、荧光下降。工作液浓度宜控制在微摩尔量级，母液现配现用。

四、功能应用

含伯胺与巯基的体系可用该标记物做快速衍生化。反应时间短，适合需要在线检测的流程，例如柱后衍生或流动体系的连续标记。

低本底检测是近红外通道的优势。样本自发荧光在 770 nm 附近很低，厚样本与浑浊体系的信噪比优于可见光通道。

巯基可及性的判断也可借助这类标记物。同一体系在加巯基与不加巯基两种条件下分别测定，信号差异反映巯基的可得程度。

短寿命标记这一特点在物料追踪中有用处。信号随时间衰减的性质，可用于判断标记发生的时间点，与稳定的酰胺键偶联物形成互补。

五、操作要点

巯基必须参与。 反应体系中需加入巯基试剂，常用巯基乙醇、巯基丙酸或 N-乙酰半胱氨酸。巯基浓度应与待标记物中的伯胺处于同一量级：过低时异吲哚产率下降，过高时巯基竞争消耗 OPA。巯基试剂本身不产生荧光，不影响读数。

pH 与缓冲液。 反应宜在 pH 9.0 至 9.5 之间进行，缓冲体系选硼酸盐，碳酸盐次之。磷酸盐在强碱性下缓冲能力不足，且可能与钙镁离子形成沉淀。pH 低于 8.5 时反应速率明显下降，高于 10 时花菁骨架开始降解。

避氧与避光。 反应液宜先脱气，操作在避光条件下完成。氧气加速异吲哚的氧化，光照加速 CY7 的漂白，两者叠加时信号衰减很快。

时间窗控制。 衍生化完成后应尽快检测，不宜过夜放置。若必须保存，宜在低温、避光、惰性气体保护下进行，保存时间以小时计。

六、Q&A

Q：不加巯基能否完成标记？

A：不能形成稳定产物。OPA 与伯胺单独反应只得到半缩胺，该结构在水中迅速水解，信号弱且不稳定。巯基的作用是提供第二条成环路径，使产物转为异吲哚。少数体系可用其他亲核试剂替代，但速率与稳定性通常不及巯基。

Q：标记后放置一夜信号大幅下降，是否说明标记失败？

A：多数情况是异吲哚水解，而非标记失败。判断办法是在检测前补加巯基并把 pH 调至 9 以上，若信号部分恢复，说明产物仍在，只是环被打开；若信号不恢复，才考虑氧化或染料降解。无论哪种情形，这类标记物都不宜长时间保存。

Q：体系中含有三羟甲基氨基甲烷缓冲液，是否需要更换？

A：需要。该缓冲液本身带伯胺，会与待标记物竞争 OPA，使标记度偏低且结果不稳定。可改用硼酸盐或碳酸盐体系；若不能更换，需先透析或超滤去除，再做标记。

本产品仅供科研使用，禁止用于任何人体实验。

点击链接，查看产品详情：邻苯二甲醛-CY7