一、产品基础信息

• 中文名称：早莲苷A-CY7

• 英文名称：EcliptasaponinA-CY7（Ecliptasaponin A-Cyanine 7）

• 常用缩写/别名：早莲苷A-CY7、早莲苷A近红外标记物、三萜皂苷CY7探针

• 规格：10mg/100mg/500mg

• 溶剂：建议先用少量无水 DMSO 或 DMF 溶解，再用缓冲液稀释；水相中宜保持低浓度以抑制胶束化

• 性状：深蓝绿色至墨绿色粉末（示意，具体以 COA 为准）

二、作用原理

三萜皂苷的偶联有一个先天限制：分子上找不到可以与活性酯反应的基团。苷元部分是碳氢骨架，糖链部分是若干糖，每个糖上带多个羟基与一个糖苷键。既无氨基也无羧基，活性酯与马来酰亚胺都无从下手。这是糖苷类分子标记的共同起点。

可行的入口在糖链的邻二醇上。糖环上相邻两个碳各带一个羟基时，这组结构对高碘酸敏感：高碘酸选择性地氧化并切断两个羟基之间的碳碳键，在两个碳上各留下一个醛基。糖环由此打开，糖链上多出一个可反应的醛。这条反应在室温水相中进行，条件温和，不需保护其他羟基。

醛基有两条去路。一条是与带氨基的染料直接还原胺化：醛与染料上的伯胺先缩合成亚胺，再用氰基硼氢化钠一类的还原剂把亚胺还原成仲胺，连接就此完成，一步到位。另一条是先与过量的二胺反应，在糖链上引出一个游离伯胺，再让 CY7 的活性酯与该氨基成酰胺键。前一条路线短，后一条灵活，可在同一条糖链上换染料而共用中间体。

这里有一个必须正视的代价：高碘酸氧化是切断反应。每氧化一组邻二醇，糖链就断一环；氧化程度越高，接上的染料越多，糖链也被切得越短。极端情况下糖链整条脱落，只剩苷元与染料，产物整体疏水，在水相中沉底。因此标记度与结构完整性在这类产品上是相互制约的两个指标，工艺上要做的是把氧化控制在“平均引入一个醛”的水平，而不是追求高标记度。COA 上标注的标记度与糖链保留情况，是判断这一平衡是否合适的依据。

CY7 接在糖链末端时朝外，荧光受骨架影响较小；接在靠近苷元处被糖链包裹，屏蔽较好，与检测体系接触也受限。同一批产品因位点分布不同，表现有差别。

三、操作要点

高碘酸要现配现用。 高碘酸钠水溶液在光照下会缓慢分解，放置过久氧化能力下降，表现为批间标记度波动。现配、避光、低温保存，用量按糖链摩尔数的一点一至一点五倍计算。

氧化条件宁可温和。 低温、短时、低浓度三条同时满足时，氧化倾向于停留在“每个糖链引入一个醛”的水平；温度升高或时间延长，多醛产物与糖链碎片同时增加。氧化一步结束后立即加入过量乙二醇或甘油淬灭残余高碘酸，再进入下一步。

还原剂的选择影响成败。 还原胺化要用选择性还原亚胺的试剂，硼氢化钠会同时把醛还原成醇，也会还原部分染料结构，导致荧光下降。还原反应在 pH 6 至 7 进行，酸性过强会使还原剂分解，碱性过强则亚胺生成效率下降。

高碘酸残留必须除净。 残余的高碘酸会继续氧化染料与产物，表现为纯化后放置一段时间荧光持续下降。淬灭之后的低分子副产物通过透析或超滤除去，不要指望靠稀释解决。

全程避光。 糖链氧化产生的醛基与 CY7 都对光敏感，操作在柔和照明下完成，中间体不宜长时间暴露。

四、选型比较

偶联路线有两条常见组合，各有适用场合。

直接还原胺化路线步骤少、周期短，适合染料端已有氨基的产品。缺点是连接点就在糖环断口处，染料离骨架很近，位阻与淬灭都要靠染料长度来补偿。

二胺桥接路线多一步，但中间体可以共用。同一批氧化后的皂苷中间体分别接 CY3、CY5、CY5.5 与 CY7，得到一系列波长不同的探针，结构差异只在染料端，跨通道比较时变量更少。做多色实验或需要横向对比时更合适。

染料端的选择由样本决定。可见光通道亮度高，适合薄样本与高时间分辨率采集；CY7 在近红外，背景低、穿透深，适合厚样本与带色样本。跨通道比较时，应把标记位点与染料差异分开考虑。

五、常见避坑

把标记度当成越高越好。 这类产品的标记度上限由糖链长度决定，超过之后增加的不是信号，而是糖链碎片与疏水副产物。标记度翻倍，荧光往往不成比例增加，反而因为聚集而下降。

用薄层判断组分时只看荧光。 糖链被切断的产物同样带荧光，在薄层上表现为比移值偏高的新带，与目标产物分得开但容易被忽略。判断组分构成应同时看荧光带与显色结果，糖类显色剂可以把含糖链的组分与不含糖链的组分区分开。

母液浓度配得过高。 皂苷类在 DMSO 中溶解度好，容易配成高浓度母液，但从有机相往水相稀释时，局部过饱和会先析出一层再缓慢重溶，实际浓度与计算值不符。稀释时逐滴加入并保持轻微涡旋。

忽略缓冲液的 pH。 糖苷键在偏碱条件下会水解，邻苯二酚类结构不存在，但糖链本身仍是薄弱环节。工作液停留在 pH 9 以上的时间应尽量压缩，配好即用。

六、Q&A

Q：为什么这个产品不能像普通小分子那样直接用活性酯标记？

A：因为分子上没有可反应的基团。活性酯需要氨基，马来酰亚胺需要巯基，皂苷两者都没有。糖链上的羟基亲核性弱，在中性水相中不解离，与活性酯混合不会发生有效反应。必须先把糖链的邻二醇氧化成醛，才有一个可以继续反应的入口。

Q：氧化之后糖链是不是就断了？

A：局部断开。高碘酸切断的是相邻两个带羟基碳之间的键，糖环由此打开，但糖与糖之间的糖苷键不受影响。控制氧化程度时，每条糖链平均引入一个醛，糖链整体仍在；氧化过度则糖链逐环被切短，直至脱落。

Q：产物在水里出现浑浊，是变质吗？

A：多为糖链损失导致的溶解度下降。糖链被切短或脱落之后，分子疏水比例上升，在水相中难以稳定分散。判断办法是离心后测上清与沉淀的荧光：两者都有荧光且比例接近，说明是分散问题；沉淀荧光明显更强，说明疏水组分富集在沉淀里。

本产品仅供科研使用，禁止用于任何人体实验。

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