一、产品基础信息

• 中文名称：羟基酪醇-吲哚菁绿

• 英文名称：Hydroxytyrosol-ICG（Hydroxytyrosol-Indocyanine Green）

• 常用缩写/别名：羟基酪醇-ICG、羟基酪醇近红外标记物、邻苯二酚ICG偶联物

• 规格：10mg/100mg/500mg

• 溶剂：建议先用少量无水 DMSO 溶解，再用缓冲液稀释；缓冲液宜预先除氧并含微量螯合剂

• 性状：深绿色至墨绿色粉末（示意，具体以 COA 为准）

二、作用原理

羟基酪醇的结构很小：一个苯环上相邻两个位置带羟基，构成邻苯二酚；对位接一条两碳的伯醇侧链。分子上没有氨基，也没有羧基，能与活性酯反应的位置只有两个酚羟基与末端伯醇。

邻苯二酚这一部分，是整个分子里化学性质活跃的位置。两个相邻的酚羟基很容易失去电子与质子，转成邻醌。这个转变在中性水相里缓慢，在碱性条件下加快，遇到微量过渡金属离子会快上许多，有光有氧时更加明显。转成邻醌之后，分子从无色变为浅黄，两个酚羟基变成两个酮羰基，亲核性基本丧失。

吲哚菁绿这一端恰好相反：它不缺电子，缺的是对氧化环境的耐受能力。七甲川共轭链上有多个易受攻击的位点，单线态氧、过氧自由基、乃至溶解氧在光照下都能让它断链。断链之后颜色由绿转黄，吸收与荧光同时消失，且不可逆。

把两者接在一起，两个薄弱环节会互相牵动。ICG 在光照下产生单线态氧，单线态氧一方面攻击 ICG 自身的聚甲川链，另一方面加速邻苯二酚向邻醌的转变；而生成的邻醌是强亲电体，会加成到 ICG 的共轭链或含氮基团上，使褪色进一步加剧。这是一条闭环：光促氧化产生醌，醌破坏染料，染料降解又释放更多活性氧。储存与操作中看到的“颜色一天比一天浅”，多数是这条环路在起作用，而不是单纯的浓度变化。

理解了这条环路，后面的操作要求就有依据：断开其中任一环即可明显延长有效期。除氧断掉底物，避光断掉能量输入，螯合剂断掉金属催化，低温降低各步速率。

三、常见避坑

缓冲液不做除氧处理。 常规配制的磷酸盐缓冲液在空气中溶解氧接近饱和，直接用于稀释相当于给氧化反应持续供料。低浓度工作液在室温下放置数小时即可看到颜色变化。缓冲液使用前以惰性气体鼓泡十分钟，或经真空脱气处理。

忽略缓冲液中的微量金属。 铁、铜离子在痕量水平就能明显加快邻苯二酚的自氧化，而常规纯水与盐类试剂中恰恰含有这些杂质。缓冲液中加入 EDTA 至 0.1 至 1 毫摩尔每升，可把这条催化通路基本阻断。含金属离子的其他组分也应先过螯合树脂。

在碱性条件下长时间操作。 偶联反应本身需要一定碱性，但反应结束后应立即调到 pH 6 至 7。停留在 pH 9 以上的时间越长，酚羟基被氧化的比例越大，产物中会出现一批酚羟基已转成醌的分子，表现为荧光正常而酚反应性下降。

用还原性助剂时不做滴定。 加入抗坏血酸一类的还原剂可以把已生成的醌还原回酚，颜色随之恢复，但过量会引入新的还原性物质，与 ICG 的激发态发生电子转移，反而降低荧光。用量应由小到大逐步试，以颜色恢复而荧光不下降为界。

把颜色恢复当成恢复如初。 醌被还原回酚只是主反应，副反应生成的加成产物无法逆转。颜色的恢复程度通常高于荧光与反应性的恢复程度，判断物料状态应以吸收光谱与薄层结果为准。

四、操作要点

母液浓度不宜过高。 邻苯二酚类在浓溶液中自氧化速率更快，且生成的醌容易发生分子间偶联。母液配成较低浓度、按单次用量分装，比配一份高浓度母液反复取用更稳妥。

稀释顺序固定。 先把缓冲液除氧并加螯合剂，再在轻微涡旋状态下逐滴加入母液，减少局部过饱和与局部高浓度带来的加速氧化。配好的工作液静置十分钟再测，让可能的聚集先达到平衡。

采集参数尽量压低。 近红外染料的激发功率与曝光时间直接决定光氧化速率。在信号可读的前提下用较低的功率、较短的曝光，配合累加平均提高信噪比，比长时间连续照射更温和。

留一份未光照的对照。 同一份工作液分成两份，一份正常采集，一份避光静置同样时长，结束时比较两者的吸收光谱。差别即为光氧化贡献的量，这个数在做长时间实验时很有用。

五、功能应用

酚类小分子在混合体系中的分配与富集位置，用近红外标记物观察背景干扰小。带色或浑浊的样本在这一波段仍可获得可读信号。

酚羟基的氧化程度与体系氧化压力的关系，可用标记物做半定量观察。颜色与吸收峰的变化反映了酚端的氧化状态，荧光则反映分子整体的位置，两者结合可区分“分子降解”与“分子转移”。

材料表面对酚类小分子的吸附与释放行为，可用标记物做连续测定。近红外通道的穿透能力支持原位读数，减少取样带来的扰动。

还原性添加物保护效果的评价，也可借助这类标记物。同一份标记物分别置于待测体系与对照体系中，比较单位时间内吸收峰的下降幅度，可得到相对的保护效果。

六、Q&A

Q：工作液配好后能放多久？

A：与体系关系很大。除氧并含螯合剂的缓冲液配制的低浓度工作液，避光冷藏可稳定数小时；未除氧、敞口放置的工作液，室温下数小时即有可见变化。判断标准是吸收光谱主峰的位置与峰高，颜色只作参考。

Q：为什么荧光还在，颜色却变浅了？

A：两种情况的叠加。酚端被氧化成醌时，颜色变化明显而 ICG 的荧光尚未受损，此时分子还在、位置信息仍有效；ICG 的共轭链被氧化时，颜色与荧光同时下降。前者可通过还原剂部分恢复，后者不可逆。

本产品仅供科研使用，禁止用于任何人体实验。

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