一、产品基础信息

• 中文名称：远志酸-罗丹明

• 英文名称：Polygalic acid-RB（Polygalic acid-Rhodamine B）

• 常用缩写/别名：远志酸-RB、远志酸罗丹明标记物、三萜酸罗丹明探针

• 规格：10mg/100mg/500mg

• 溶剂：建议先用少量无水 DMSO 或 DMF 溶解，再用缓冲液稀释

• 性状：紫红色至深红色粉末（示意，具体以 COA 为准）

二、作用原理

远志酸属齐墩果烷型五环三萜。骨架由五个稠合的环构成，几乎不带极性基团，在水相中的溶解度很低；可供共价偶联的位点是骨架上的羧基，其余位置以羟基与饱和碳为主，不具备与活性酯反应的条件。

罗丹明这一端以氨基化形式提供反应对手。羧基先与碳二亚胺类试剂反应，生成 O-酰基异脲中间体，再由 N-羟基琥珀酰亚胺接管，转成活性酯；活性酯与罗丹明的氨基缩合，形成酰胺键，副产物为水溶性的 N-羟基琥珀酰亚胺，可通过透析或凝胶过滤除去。整条路线不需要对三萜骨架做保护与脱保护。

这个体系有两点结构后果需要说明。一是三萜骨架疏水，标记产物在缓冲液中的临界聚集浓度低，浓度稍高就会形成分散体，染料间距缩短，罗丹明的自淬灭随之出现。二是罗丹明带一个正电荷，接在疏水骨架上之后，分子一端亲脂、一端带电，既会向脂相分配，也会被带负电的表面吸附，两种行为叠加在一起，读出的分布图样需要结合体系电荷来判断。

三、常见避坑

高浓度下会生成对称酸酐。 羧酸在碳二亚胺存在下，除了被 N-羟基琥珀酰亚胺截获，还有一条并行的路：一个已活化的羧基被另一个未活化的羧基进攻，生成两分子酸缩合而成的对称酸酐。这条副反应在反应物浓度高、体系含水量低、活化剂过量时表现得更明显。产物表现为保留时间提前、荧光标记度偏低，但反应转化率看上去并不低。控制办法是压低起始浓度、把活化剂的当量控制在一点二到一点五倍、并保证体系中有足够的水相比例。

活化酯会水解。 活性酯在水相中并不稳定，pH 越高、放置越久，水解回羧基的比例越大。表现为同一批物料，活化后立刻加料的偶联率高，放置半小时再加料的偶联率明显下降。两步操作的间隔应尽量压缩，活化液不宜提前配好待用。

疏水骨架会带来物料损失。 三萜酸在缓冲液中的溶解度有限，容易吸附在塑料管壁与滤膜上，低浓度工作液的损失比例尤其高。容器宜选低吸附规格，过滤除菌改为离心取上清，可减少这部分损失。

碱性过强会让罗丹明开环。 罗丹明的内酯环在强碱性条件下开环，形成无色的螺环结构，吸收与荧光同时下降，回酸后又恢复。偶联体系的 pH 不宜超过 9。

四、操作要点

两步的 pH 不同。 活化一步宜在 pH 5.5 至 6.5 之间进行，此时羧基以未解离形式存在，亲核进攻效率较高；偶联一步升到 pH 7.5 至 8.5，使罗丹明的氨基保持游离。缓冲体系可选 2-(N-吗啉代)乙磺酸或磷酸盐，前者在低 pH 区缓冲能力更好。

加料顺序固定。 先把远志酸与 N-羟基琥珀酰亚胺混合，再加入碳二亚胺启动活化，室温反应十五至二十分钟；随后一次性加入罗丹明的氨基衍生物，避光反应两小时以上。颠倒顺序会让罗丹明先与活化剂接触，产生不必要的副产物。

反应结束要淬灭。 加入少量羟胺或甘氨酸，消耗残余的活性酯，静置十分钟后再进入纯化。跳过这一步，残余活性酯会在纯化过程中与柱料或膜材上的基团反应，造成产物损失与柱效下降。

纯化与判定。 透析适用于体积较大的批次，凝胶过滤适用于小批量且需要较快出结果的情形。判定偶联是否成立，看三件事：产物在罗丹明主峰处的吸收与 280 nm 处吸收的比值是否高于原料、薄层或柱层析上是否出现新的荧光带、以及酸化与碱化前后颜色是否可逆。

五、功能应用

三萜类小分子在混合体系中的分配倾向，用标记物观察比终点取样更细。把标记物加入两相体系，按时间点取样测定两相荧光强度，可以得到分配比随时间的变化曲线。

疏水载体对三萜酸的吸附容量，用标记物测定比质量法灵敏度更高，也更适合低浓度区间。吸附等温线的低浓度段用荧光法更容易做全。

材料表面的疏水改性效果，可用标记物做定性判断。标记物优先吸附在疏水区域，荧光分布的不均匀程度反映了改性的均匀程度。

制备过程中的物料去向，也可以借助标记物追踪。哪一步损失多、损失在哪个组分里，通过分段测定荧光即可定位。

六、Q&A

Q：活化与偶联能否一步完成？

A：技术上可行，但副产物会增加。一步法时活性酯与未活化的羧基共存，对称酸酐的生成比例上升，且罗丹明的氨基会同时与活化剂竞争。分两步做，中间不必换体系，只是把加料时间错开，操作成本增加有限。

Q：产物在薄层上出现两个荧光点，怎么判断？

A：先看这两个点的颜色与比移值。若一个点的比移值与游离罗丹明一致，说明是未反应的染料，纯化不充分；若两个点都比游离染料低、且彼此接近，多为单取代与双取代的差别，需要用质谱确认。三萜酸若含两个以上羧基，这种情形会经常出现。

Q：罗丹明的正电荷会不会影响吸附结论？

A：会。带正电的标记物会被带负电的表面额外吸附，测到的量高于真实的疏水吸附量。判断办法是做一组盐梯度洗脱：随盐浓度升高而解吸的部分属于静电吸附，不随盐浓度变化的部分才更接近疏水吸附。也可以用不带电的染料版本做平行对照。

本产品仅供科研使用，禁止用于任何人体实验。

点击链接，查看产品详情：远志酸-罗丹明