一、产品基础信息

• 中文名称：辅酶Q10-荧光素

• 英文名称：Ubiquinol-FITC（Ubiquinol-Fluorescein Isothiocyanate）

• 常用缩写/别名：泛醇-FITC、还原型辅酶Q10荧光标记物、CoQ10H₂-FITC

• 规格：10mg/100mg/500mg

• 溶剂：建议先用少量无水 DMSO 或 DMF 溶解，再用缓冲液稀释

• 性状：橙黄色至橙红色粉末（示意，具体以 COA 为准）

二、作用原理

泛醇的结构分两部分。一部分是带两个酚羟基的苯醌母核，处于还原态，两个羟基可以分步失去电子与质子，先成半醌、再成醌；另一部分是十个异戊二烯单元连成的侧链，几乎全由碳氢构成，极性很低。前一部分决定它的氧化还原行为，后一部分决定它往脂相里分配。

荧光素是性质相反的一类分子：氧杂蒽母核，带一个羧基，水溶性较好，发光依赖酚羟基的解离状态，因而对 pH 敏感。

把两者接起来，得到的分子在结构上落差很大：一端是十个异戊二烯单元的疏水链，另一端是带电荷的亲水发色团。这个落差带来两个直接后果。一是它在水相中不再是真溶液，浓度稍高就会自组装成聚集体，荧光读数与浓度失去线性；二是荧光素的信号随环境 pH 改变，读数需要固定 pH 才能横向比较。

偶联通常经连接臂完成：泛醇的酚羟基先与带氨基的连接臂成键，再让 FITC 的异硫氰酸酯与游离氨基形成硫脲键。这条路线回避了一个结构上的障碍——泛醇没有伯胺，FITC 的异硫氰酸酯缺少直接反应的对象。

荧光素这一端的发光还依赖酚羟基的解离状态。pH 偏低时发光基团以中性形式存在，量子产率下降；pH 升高，发光增强，过高又会加快光漂白。因此同一份样品在不同缓冲体系中的读数不宜直接比较，跨批次的定量应在固定 pH 下完成。这一点在脂相体系中容易被忽略，因为聚集体内部的局部环境可能与缓冲液本体不同。

三、常见避坑

碱性既是标记的条件，也是泛醇失稳的条件。

FITC 与氨基的反应窗口在 pH 8.5 至 9.5，pH 偏低时氨基质子化，反应速率迅速下降。而泛醇在碱性且有氧的条件下氧化为泛醌的速率明显上升。两项要求彼此冲突，这是这类标记物在制备与使用两端都要处理的问题。可行的做法是压低溶氧、降低反应温度、缩短暴露时间，并在反应体系中加入少量还原性助剂。

偶联后溶解度下降，属正常现象。 

泛醇本身脂溶性很强，接上一个带电荷的发色团之后，两端性质差距进一步拉大。工作液浓度偏高时出现乳光或析出，多数是自组装或过饱和，并非物料失效。判断依据是稀释后能否重新澄清，以及吸收光谱的峰位是否仍与标示一致。

信号下降先排查氧化状态，不必先怀疑染料。 

泛醇氧化为泛醌之后，荧光基团仍在，但分子两端的亲水疏水比例改变，聚集行为随之改变，表观亮度下降。氧化型与还原型在紫外区的吸收峰位不同，测一次光谱即可估计氧化比例，比反复重配省事。

含过氧化物的溶剂会加速失效。 

醚类与部分极性溶剂开封后易生成过氧化物，微量即可推动酚羟基氧化。溶剂应选低过氧化物规格，开封后分装并充惰性气体。

溶剂的含水量会改变聚集状态。 

无水 DMSO 开封后持续吸湿，含水量上升会降低泛醇部分的溶解度，稀释时更容易出现局部析出。溶剂分装干燥保存，取用后立即封口，是成本较低的一项措施。

四、操作要点

母液用无水 DMSO 或 DMF 配制，浓度按 COA 标示量折算，配好后按单次用量分装，冻存于 -20℃ 以下，取用一管解冻一次。

固体与母液均需避光。荧光素对光敏感，长时间强光下会出现光漂白与光氧化，操作在柔和照明下完成。

工作液现配现用。从母液向缓冲液稀释时不宜一次性倒入，宜在轻微涡旋状态下逐滴加入，减少局部过饱和。稀释后若有乳光，可短时超声并静置，仍不澄清则降低起始浓度重配。

容器选低吸附离心管。两端性质反差大的分子在普通塑料壁上的损失不可忽略，低浓度工作液尤为明显。

测定前固定 pH 与温度。荧光素的发光强度随 pH 变化，样品与标准品应在同一缓冲体系、同一温度下读数。

五、Q&A

Q：为什么不能用 FITC 直接与泛醇反应？

A：FITC 的异硫氰酸酯只与伯胺、仲胺这类富电子的氮反应。泛醇分子上没有氨基，酚羟基的亲核性又不足以在常规条件下进攻异硫氰酸酯碳，因此需要先经连接臂引入氨基。

Q：标记产物的荧光强度为什么不随浓度线性增长？

A：疏水链在水相中驱动分子自组装，浓度升高后染料间距缩短，出现自淬灭，同时散射增强。做定量时应先跑一条浓度与强度的曲线，把工作区间控制在曲线仍呈线性的那一段。

Q：能否用荧光强度直接推算泛醇的氧化比例？

A：不宜。荧光强度受聚集、pH、微环境影响，与氧化状态不是一一对应关系。需要判断氧化比例时，以紫外区吸收峰位与峰形为主要依据，荧光作为辅助。

Q：反复冻融对标记物有什么影响？

A：冻融会促进聚集与析出，同时增加氧化暴露的机会。母液按单次用量分装，是减少这类损失的有效做法。

本产品仅供科研使用，禁止用于任何人体实验。

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