一、产品基础信息

• 中文名称：木聚糖-吲哚菁绿

• 英文名称：Xylan-ICG（Xylan-Indocyanine Green）

• 常用缩写/别名：木聚糖-ICG、Xylan-Indocyanine Green conjugate、多糖近红外标记物

• 规格：10mg/100mg/500mg

• 溶剂：建议先用少量 DMSO 或 DMF 助溶，再用缓冲液稀释；部分批次可直接分散于水相

• 性状：深绿色至墨绿色粉末（示意，具体以COA为准）

二、作用原理

木聚糖是植物细胞壁里的半纤维素，主链由木糖经 β-1,4 糖苷键连接而成，链上密集分布羟基，部分来源还带有葡萄糖醛酸侧链。它没有还原端之外的游离氨基，也没有巯基，能参与偶联的只有羟基与可能存在的羧基。

吲哚菁绿是近红外区的花菁染料，两个磺化吲哚环之间由一条短共轭链相连，吸收约 780 nm、发射约 800 nm。两个磺酸基让它带负电、有一定水溶性，同时也意味着它本身没有可直接反应的活性基团——常规做法是使用预先带上活性酯或氨基的 ICG 衍生物，先解决“接得上”的问题。

羟基与活性酯之间不发生有效反应。木聚糖的羟基 pKa 在 12 以上，近中性水相中基本不解离，亲核性弱。要让偶联成立，需要先给羟基引入一个可反应的把手：常见做法是用氯乙酸或琥珀酸酐在碱性条件下把部分羟基转成羧甲基或半琥珀酸酯，再通过碳二亚胺活化接上带氨基的 ICG 衍生物；另一条路线是先用高碘酸盐把部分糖环打开、产生醛基，再与带氨基的 ICG 形成席夫碱并还原。前者改动小、位点分布较均匀，后者引入的修饰更明显。

这里有一个必须正视的性质：ICG 与多糖、蛋白、脂质之间存在相当强的非共价结合。它的芳香稠环体系偏疏水，磺酸基提供静电作用，两者叠加使 ICG 容易贴附到大分子表面。这意味着制备过程中“接上去”和“裹进去”可能同时发生。共价产物与物理包载的产物在外观、颜色、甚至荧光强度上都可能接近，但行为不同：物理包载的 ICG 在透析、超滤、或者体系极性变化时会缓慢释放，共价连接的不会。

木聚糖本身是多分散的。同一条产品线里，糖链长度存在分布，标记度只能给出平均值。链长不同的标记物在体系中的扩散速率、分配行为、与识别元件的接触概率都不一样。这一点在解读分布数据时需要考虑：看到的是平均行为，不是单一分子的行为。

三、选型比较

近红外区的多糖标记物有几种常见方案，选择依据是实验目的与检测条件。

ICG 方案。 

波长较长，组织散射小、自发荧光低，适合厚样品；缺点是染料本身疏水、易聚集，且与生物大分子有非共价结合倾向，对纯化与表征的要求更高。

CY7 方案。

同为近红外染料，分子更紧凑，水相分散性通常好于 ICG，非特异吸附相对轻；缺点是激发发射位置比 ICG 略短，穿透深度稍逊。

可见光区方案（FITC、CY3、CY5）。 

标记化学成熟、表征手段齐全，适合薄样品与体外体系；缺点是组织自发荧光与散射的限制明显。

选择时还有一条容易被忽略的因素：检测设备。ICG 的 780 nm 激发对激光器与滤光片有特定要求，部分系统在该波段的效率低于 640 nm 或 488 nm 通道。设备条件不匹配时，换染料比调参数更有效。

四、常见避坑

分不清共价连接与物理包载。 

这是多糖-ICG 体系里的核心问题。判断办法有几种，建议组合使用：透析或超滤至外液无色后，测保留液的荧光，若持续下降说明有游离或松散结合的染料；用能溶解游离 ICG 但不溶解多糖的溶剂洗涤沉淀，看洗液是否带色；走一次凝胶过滤，观察染料信号是否与多糖峰重合，出现第二个染料峰即说明存在未结合部分；冻干复溶后比较荧光回收率，物理包载的产物在这一步损失更明显。

多糖的多分散性被当成批次差异。 

同一产品不同批次之间，链长分布可能有差别，表现为同一浓度下溶液的黏度、扩散行为、甚至荧光强度不一致。这属于多糖本身的性质，不是标记失败。做定量比较时应在同一批次内完成，跨批次比较需要先做一次平行验证。

ICG 聚集导致读数偏低。 

ICG 在水相中浓度升高会形成聚集体，吸收峰蓝移、荧光下降。工作浓度不宜过高，配制后尽快使用。判断依据是吸收光谱在 720 nm 附近是否出现肩峰。

有机溶剂残留影响多糖构象。 

助溶用的 DMSO 或 DMF 如果残留比例较高，可能改变多糖链的伸展状态，进而影响分布结果。稀释后有机相比例建议控制在较低水平，必要时用透析或冻干复溶的方式换液。

光照与温度。 

ICG 对光敏感，水溶液中的稳定性随时间下降。操作在避光或柔和照明下完成，工作液不过夜，减少反复升降温。

五、Q&A

Q：怎么证明 ICG 是共价接在木聚糖上的？

A：单一方法不足以定论，建议三条证据并用。其一，充分透析或多次超滤后，染料仍与多糖共沉淀、不被洗脱；其二，凝胶过滤中染料信号与多糖峰的洗脱位置重合，没有独立的染料峰；其三，用多糖的非溶剂把产物沉淀下来，沉淀带色而上清无色。三条同时满足，可以认为共价连接占主导。

Q：标记度为什么只有一个平均值？

A：木聚糖是多分散体系，糖链长度本身有分布，每条链上的可及羟基数量不同，接上的染料数也不同。表征手段给出的是整体平均，无法对应到单条链。需要研究链长与标记度的关系时，应先用制备级凝胶过滤或超滤做分级，再对各级分别表征。

Q：木聚糖带负电，ICG 也带负电，为什么还能结合？

A：静电只是其中一个作用力，而且在这个体系里是排斥的。驱动结合的主要是 ICG 芳香稠环与多糖疏水微区之间的作用，以及偶联反应本身的共价键。也正因为静电排斥，单纯混合很难得到稳定产物，共价连接才是可靠路径。

Q：和荧光素标记的木寡糖相比怎么选？

A：看分子与场景。木寡糖链短、位点少、行为接近小分子，可见光区标记足够，表征也简单；木聚糖链长、多分散、在体系里更像高分子，需要近红外通道才能看到较深的位置。两者在实验里不能互相替代，一个回答寡糖的转运，一个回答多糖的分布与降解。

本产品仅供科研使用，禁止用于任何人体实验。

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