一、产品基础信息

• 中文名称：山椒素-CY7

• 英文名称：sanshool-CY7

• 常用缩写/别名：羟基山椒素-CY7、Hydroxy-sanshool-CY7、近红外山椒素探针

• 规格：10mg/100mg/500mg

• 溶剂：建议先用少量 DMSO 或 DMF 助溶，再用缓冲液稀释

• 性状：深绿色至蓝绿色粉末（示意，具体以COA为准）

二、作用原理

山椒素属于烷基酰胺类小分子，主链是一条十二碳三烯酸经酰胺键与异丁胺相连，链上带三个双键，另有一个羟基。整条分子几乎由碳氢构成，极性基团少，脂溶性很强。CY7 是七甲川花菁染料，两个吲哚环之间由一条较长的共轭链连接，吸收约 750 nm、发射约 773 nm，同样偏疏水。

把两个疏水分子接在一起，得到的是一个疏水性更强的标记物。这个性质带来两方面后果。

有利的一面在光学上。近红外区的激发与发射避开了生物样本内源荧光集中的波段，胶原、黄素、辅酶类物质的发射主要在可见光区，在 770 nm 以上的贡献很小。同时组织对近红外光的散射明显弱于蓝绿光，光子能走得更深。做较厚的样本、或者本身自发荧光较强的体系时，近红外通道的背景更干净，信号更容易从背景里分出来。

不利的一面在化学上。疏水性强意味着分子会主动寻找疏水环境，而体系里到处都有：蛋白的疏水口袋、膜的脂质层、塑料器壁、封片介质里的疏水组分。这些位点与标记物之间没有特异性，但结合得不弱。结果是信号出现在不该出现的位置，读起来像是“分子富集在这里”。

区分“真信号”与“吸附信号”，靠的是可竞争性。真正与靶点结合的分子，可以被过量的未标记山椒素竞争下来，信号随竞争物浓度上升而下降；非特异吸附的位点没有饱和性，竞争物也占据不了同样的位置，信号下降不明显。这一组对照是近红外疏水标记物的常规配置，不是可选项。

CY7 还有一条与结构相关的性质需要提前知道：七甲川共轭链比三甲川、五甲川更长，在含水体系中更容易与同类分子叠合，形成 H-型聚集体。叠合之后吸收峰蓝移，荧光强度下降。表现为浓度升高时信号不增反降，或者稀释后反而变亮。判断依据是吸收光谱在 700 nm 附近是否出现肩峰。

三、操作要点

母液配制。 

山椒素-CY7 在水中的溶解度有限，应先用无水 DMSO 或 DMF 配成母液，确认澄清后再用缓冲液逐级稀释。稀释时边加边混，减少局部过饱和。母液浓度按 COA 标示量折算。

控制工作浓度。 

由于聚集倾向，工作浓度不宜过高。建议先做一组浓度梯度，读吸收光谱，观察 750 nm 主峰与短波侧肩峰的比例，把工作浓度定在肩峰出现之前的区间。

选择低吸附容器。 

疏水分子在普通塑料表面的损失明显，低浓度工作液尤其如此。低吸附离心管、硅化处理过的玻璃器皿可以减少这部分损失。配制后尽快使用，不宜长时间静置。

设置吸附对照。 

除了未标记物的竞争实验，还可以做一组“无靶点样本”的平行处理，用相同浓度、相同流程孵育，观察信号是否仍然出现。这一组能直接反映体系的非特异背景水平。

注意近红外通道的仪器状态。 

多数成像系统的近红外检测器灵敏度低于可见光通道，暗电流与背景校正的差异也更明显。正式采集前先读一次空白，确认背景均匀；不同批次采集之间保持相同的增益与曝光设置，否则组间比较没有意义。

保存。 

按标签条件避光干燥保存，母液分装后置于 -20℃，减少冻融次数。花菁染料在光照与潮湿条件下降解较快，工作液不过夜。

四、常见避坑

把吸附信号当成定位结果。 

这是近红外疏水探针常见的误判来源。表现为信号分布与已知的靶点位置不符、边界模糊、在空白区域也出现亮点。处理办法是补做竞争实验，或者用去污剂温和洗涤后复看——非特异吸附的部分更容易被洗掉。

稀释后信号变强，以为是操作失误。 

这是聚集的典型表现。高浓度时分子叠合、自淬灭，稀释后解聚、荧光恢复。遇到这种情况不必反复重配，读一次吸收光谱确认肩峰，把浓度降下来即可。

近红外通道的串色。 

CY7 的激发波长接近 750 nm，部分系统的 750 nm 激光器同时会微弱激发其他远红染料。做多色实验时，先用单标样本逐个通道采集，确认每个通道只有对应信号。

固定与封片引入的额外背景。 

部分封片介质在近红外区有弱发射，固定剂处理也可能改变样本的散射特性。换介质前后各读一次空白，可以定位背景来源。

忽略标记度对行为的影响。 

标记度升高时，分子的疏水性进一步增加，非特异吸附与聚集倾向同步上升。不同批次的标记度可能不同，具体以 COA 标示为准；做定量比较时应在同一批次内完成。

五、Q&A

Q：近红外成像的优势，在这类疏水标记物上还成立吗？

A：光学层面的优势成立——背景低、散射小、穿透深，这些由波长决定，与分子性质无关。但化学层面的干扰同时被放大：疏水性越强，非特异吸附越明显。两者要分开看，不能因为背景干净就默认信号可信。

Q：怎样确认信号来自标记物而不是样本自发荧光？

A：做三组对照。未标记样本走相同的流程，看该通道是否仍有信号；标记样本加过量未标记山椒素竞争，看信号是否下降；标记样本在无靶点的体系里孵育，看背景水平。三组都做过，结论才站得住。

Q：为什么高浓度时荧光反而下降？

A：CY7 的共轭链较长，浓度升高后分子间容易叠合成 H-型聚集体，吸收峰蓝移，激发态能量以非辐射途径耗散。表现为信号随浓度上升而增长变缓、甚至回落。做浓度梯度时，线性区间通常比肉眼估计的窄。

Q：和 CY5 版本相比怎么选？

A：看样本厚度与背景水平。样本薄、背景可控时，CY5 的检测器效率更高、信号更容易读；样本厚、自发荧光强、需要更深穿透时，CY7 的优势才体现出来。两者的疏水性都高于可见光染料，非特异吸附的对照实验都需要做。

本产品仅供科研使用，禁止用于任何人体实验。

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