一、产品基础信息

• 中文名称：甘胆酸硫酸盐-罗丹明

• 英文名称：Glycolithocholic acid-RB（Glycolithocholic acid-Rhodamine B）

• 常用缩写/别名：GLCA-RB、甘氨石胆酸硫酸酯-罗丹明、硫酸化甘胆酸荧光标记物

• 规格：10mg/100mg/500mg

• 溶剂：建议先用少量 DMSO 或 DMF 助溶，再用缓冲液稀释

• 性状：红色至深红色粉末或冻干粉（示意，具体以COA为准）

二、作用原理

胆汁酸类分子的标记有一个容易误判的地方：官能团数量不算少，能发生偶联的只有一个。甘胆酸硫酸盐的结构可以拆成三块，逐块看反应性就清楚了。

一块是石胆酸的甾体骨架。四个环稠合，刚性较强，表面以碳氢为主，没有可供修饰的极性基团。这一块决定了分子的整体形状与疏水面貌，也是它与蛋白结合时的主要接触面。

另一块是 C3 位的硫酸酯基。硫酸是强酸，硫酸酯在近中性水相中基本解离，带一个负电荷。它给分子提供了水溶性和电荷特征，但不具备亲核能力——氧上的孤对电子被硫强烈吸引，遇到活性酯不会主动进攻。这一位在分子里是“已占位”的状态，不适合再作为偶联落点。

再一块是 C24 位经酰胺键连上的甘氨酸。甾体的羧基与甘氨酸的氨基缩合成酰胺，这个酰胺氮的孤对电子与羰基共轭，同样不反应。但甘氨酸那一端还留着一个游离羧基，这个羧基是整个分子里仅有的可修饰位点。

标记因此走羧基路线。常规做法有两种：其一是用碳二亚胺类试剂把羧基活化成活性酯，再与带氨基的罗丹明衍生物成酰胺键；其二是先接一段二胺桥，把羧基转成游离伯胺，再让罗丹明-NHS 酯与之反应。两者的差别在于间隔臂长度与副产物的除去方式，前者步骤少、后者间隔更宽。

罗丹明 B 走红通道，吸收约 550 nm、发射约 570 nm。接在甘氨酸端意味着染料位于甾体骨架之外，对骨架构象的影响较小；但甾体本身体积不小，间隔臂过短时，染料会贴近骨架的凹面，影响分子与识别元件的接触。

还有一条性质需要单独说明：硫酸酯基在强酸条件下会水解。pH 7.4 的常规缓冲体系中稳定，但遇到 pH 低于 3 的条件、或者长时间停留在酸性介质里，硫酸酯可能脱落，产物变成不带电荷的甘胆酸-罗丹明。这个变化不改变荧光颜色，却会改变分子的电荷状态与分配行为，读数上的异常容易被误判为标记物降解。

三、常见避坑

酸性条件会改动分子而不是染料。 

用酸性展开剂做薄层、或者用酸性固定液处理样本，硫酸酯都可能部分脱落。脱落之后分子少一个负电荷，电泳迁移和离子交换行为随之改变。判断依据是看荧光条带的位置是否整体偏移，而不是看强度是否下降。

活化后的羧基会优先和水反应。 

碳二亚胺活化的中间体在水里不稳定，半衰期以分钟计。缓冲液如果含水比例高、又没有控制好加入顺序，活化酯大部分会水解回羧基，表现为偶联效率偏低、游离染料残留多。常规处理是把活化与偶联放在低水分的同一体系内连续完成，中间不换液。

体系里不能有伯胺缓冲液。 

Tris、甘氨酸这类含伯胺的缓冲液会与目标羧基竞争，把活化酯消耗掉。磷酸盐、碳酸氢盐、HEPES 是可用选项。

低浓度工作液会贴壁。 

甾体骨架疏水，加上罗丹明的芳香体系，分子在普通塑料表面的吸附不可忽略。低浓度工作液配好后放置一段时间再测，浓度可能已经低于计算值。低吸附离心管与现配现用可以减少这部分损失。

四、操作要点

助溶顺序建议固定：先称固体，加少量无水 DMSO 或 DMF 溶成均匀母液，母液浓度按 COA 标示量折算，再用缓冲液逐级稀释，每级混匀后再进入下一级。甾体类分子从有机相突然进入水相时容易局部过饱和，一次倒入会出现雾状或细沉淀。

pH 窗口控制在 7.0 到 8.0 之间。低于 6 时硫酸酯的水解速率上升，高于 9 时罗丹明的荧光量子产率下降，两个方向都不划算。

纯化方式按体系选择。透析适合除去小分子副产物与游离染料，但要注意透析袋对疏水分子有吸附，回收率会偏低；超滤速度快，适合浓缩，但膜材同样会截留一部分产物；需要精细分离时用凝胶过滤，甾体标记物在柱上容易出现拖尾，收集窗口应取峰的前半段。

保存按标签条件避光干燥进行。母液分装后置于 -20℃，减少反复冻融；工作液不过夜。

五、Q&A

Q：硫酸酯基会不会在使用过程中脱落？

A：常规 pH 7.4 的缓冲体系中稳定。风险集中在酸性条件：pH 低于 3 的介质、酸性染色或酸性展开剂，以及长时间低温存放后体系 pH 发生漂移的情况。做电荷相关实验前，建议用同一批样品在目标缓冲液里预孵一段时间，读一次电泳或离子交换行为作为基线。

Q：为什么标记落在甘氨酸端，而不是 C3 位？

A：C3 位被硫酸酯占据，氧的孤对电子被硫吸引，不具备亲核性；甾体骨架本身也没有游离羟基可接。分子里能参与偶联的只有甘氨酸端的羧基。这也意味着标记位置相对固定，批次之间的差异主要来自标记度，而不是位点分布。

Q：怎么设置未标记的对照？

A：用同一批次的甘胆酸硫酸盐做平行样本，浓度按标记度折算到相同摩尔量。需要区分“染料带来的信号”和“分子本身的行为”时，这组对照比空白缓冲液更有意义。

Q：染料接在甘氨酸端，会不会影响分子与蛋白的结合？

A：取决于结合界面的位置。甾体骨架与硫酸酯基是主要的识别特征，甘氨酸端朝外，接入染料后空间扰动相对较小；但染料体积不小，做定量结合实验时应先做一组浓度梯度，确认标记物与未标记物的曲线形状是否一致。

本产品仅供科研使用，禁止用于任何人体实验。

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