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2026年11月06日 11:01 来源:
从烟酸-FITC 换到烟酸-CY7,下意识的反应往往是:烟酸本来就只有几个原子,染料反而占了大半,那这个分子到底还算不算烟酸的探针?这个疑问合理,答案也直白:染料换到近红外,换的是“能不能看见”和“在哪儿看得见”,不是换掉烟酸本身。烟酸的两性结构还在,只是信号被搬到了另一个窗口。下面说说这个换法带来了什么。
烟酸的骨架是吡啶环,3 位挂一个羧基。这个组合在化学上很有意思:吡啶氮能接受质子,羧基能给出质子。
在接近中性的水相里,它以一种两性离子状态存在——氮带正电、羧基带负电,整体净电荷接近零。这个状态让它既溶于水,又不像纯阴离子那样容易被带正电的表面吸走。
这种“两头都不极端”的性质,是小分子示踪里比较难得的。换成 CY7 之后,这部分特征并没有丢,因为标记位点的选择可以避开它。
CY7 是七甲川花菁染料,吸收约 750 nm、发射约 775 nm,落在近红外区。
这一段的好处是背景低。样本自身的自发荧光在可见区很热闹,到这个波段已经弱下去了。所以对厚一些的样本,近红外的信号能穿出来,可见区的信号往往被吸收和散射吃掉。
代价也要说清。CY7 的波长更长,单位浓度的信号强度通常略低于 CY5.5;同时它对设备有要求,需要匹配近红外波段的激发光源与滤光片,普通可见区配置读不到。
所以“换 CY7 值不值”,很大程度上取决于你手上有什么设备,以及样本有多厚。
偶联有两条路,选哪条会改变分子性格。
走羧基:做成活性酯后与带氨基的连接臂成酰胺键。路线可控,产物单一,但羧基被消耗掉,两性离子状态就破了,分子整体开始偏正。
走吡啶氮:做成 N-烷基化产物再接染料。羧基保留下来,代价是环上带了恒定正电荷,水相行为与原始分子差别更大,跑色谱时保留时间会明显前移。
两条路线得到的光谱几乎一样,靠光谱区分不出来。所以做对照的时候,不能只比荧光亮度,还得比分配行为——比如在两相体系里的分布比,或者色谱保留时间。
CY7 在通道序列的远端,位置比较省心。
常见的搭配是绿通道给 FITC 或类似染料,橙红给 CY3,红给罗丹明,远红给 CY5 或 CY5.5,CY7 收在末尾。这样五色排下来,彼此的间隔还算够。
要留意的是 CY5.5 和 CY7 的位置比较近。两者的发射有部分重叠,如果一定要同时用,得做单色对照把补偿算清楚。多数情况下,这两个里挑一个就够。
这是两性离子带来的直接结果。净电荷接近零,分子之间不容易靠静电抱团,水合层也稳定,所以不需要高比例的有机助溶剂。
真要配高浓度母液,还是建议先用少量 DMSO 溶开,再逐滴加进缓冲液,边加边混。一次性把浓溶液倒进大量水相,局部过饱和很容易析出,尤其是 CY7 这类带长共轭链的染料。
配好之后避光、低温保存。CY7 对光比较敏感,操作尽量在弱光下做,别放在台面上照一下午。
想更系统地了解它的结构与配制方法,可前往新维创生物官网查看对应技术文章与产品页。
本产品仅供科研使用,禁止用于任何人体实验。
点击链接,查看产品详情:烟酸-CY7
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