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2026年10月12日 10:39 来源：
做小分子从凝胶或微球中释放实验的研究者，很多都在用取样离心测吸光度的传统方法。这种方法虽然经典，但操作繁琐，每次取样都要破坏平衡，时间点密集的时候工作量很大，而且对于释放浓度低的体系，紫外吸光度的灵敏度常常不够用。用可见光区荧光探针标记倒是可以提高灵敏度，但凝胶基质本身——比如壳聚糖、海藻酸钠、胶原蛋白——在可见光区往往有不同程度的自发荧光和光散射，测到的信号里掺杂了不少背景，扣除起来很麻烦，数据重复性也受影响。
ICG的发射在820nm附近，这个波长下绝大多数水凝胶基质的自发荧光已经非常微弱，光散射也比可见光区小很多。
把烟酸标记上ICG之后，就可以直接用近红外成像系统对凝胶样品进行整体扫描，无需取样、无需离心，在不同时间点原位观察荧光信号的分布变化，不仅操作更简便，还能获得小分子在凝胶内部扩散的二维分布信息，而不仅仅是释放到上清液中的总量。
这种时空分辨信息是传统离线检测方法难以获取的。不过也需要认识到，近红外检测器的普及程度不如可见光区，并不是每个实验室都配备了800nm以上的检测系统。
但用ICG做示踪有个很容易踩的坑——浓度淬灭。很多人觉得探针浓度越高信号越强，于是配制很高的工作浓度，结果发现信号反而更弱。这是因为ICG在高浓度下会形成非荧光的聚集体，荧光量子产率急剧下降。更隐蔽的是，当标记的小分子从载体中突释时，局部浓度突然升高，也可能短暂出现淬灭现象，导致你误以为释放量很少。
解决这个问题没有捷径，需要在正式实验前认真做浓度梯度曲线，确定线性检测范围，将工作浓度控制在淬灭阈值以下。
ICG在含血清或蛋白的体系中会与蛋白结合，结合后荧光强度会增强，这一点在做蛋白相关体系时需要用对照扣除。
缓冲液方面，ICG在PBS中的稳定性比在纯水中稍差，建议母液用去离子水或甲醇配制，临用前再用缓冲液稀释。
样品板建议用黑色不透光的96孔板，透明板中孔间串光在近红外区也可能发生，虽然比可见光区轻，但做高精度定量时还是要留意。
本文仅从荧光检测技术角度讨论近红外探针在释放实验中的应用特点，供相关领域实验人员参考交流，产品禁止用于任何人体试验。
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