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2026年10月12日 10:35 来源:
做植物组织切片荧光成像的研究者,大多被叶绿素的自发荧光折磨过。不管用FITC通道还是罗丹明通道,激发光一打下去,整片组织都是红通通或者绿油油的背景,目标探针的信号被淹没得严严实实,后期调光增益和对比度调到眼睛发酸,还是分不清楚哪些是真信号、哪些是叶绿素自发荧光。木质素在紫外到可见光区也有宽范围的发射,进一步加剧了背景污染。有研究者尝试用数学算法进行光谱拆分,但这要求仪器具备光谱扫描功能,而且拆分效果在信号弱的时候并不理想。
CY7的发射峰在780nm附近,这个波段已经远离叶绿素的主要发射范围(叶绿素在680nm左右有强发射峰),木质素在这个波段的自发荧光也大幅减弱。
从光学原理上讲,波长越长,光在散射介质中的穿透深度越大,瑞利散射强度与波长的四次方成反比,780nm近红外光的散射比488nm蓝光弱了不少,这意味着在较厚的组织切片中,近红外信号可以从更深的位置被检测到。
小檗胺标记上CY7之后,就可以利用这个近红外窗口进行观察,信噪比相比可见光通道会有明显改善。
当然,近红外成像并非只有优势。普通共聚焦显微镜的检测器在近红外区的量子效率通常比可见光区低,也就是说相同功率下检测到的信号会弱一些,可能需要适当提高激发光功率或者增加PMT电压,这反过来又会加速光漂白。
CY7的光稳定性本来就不算出色,在高功率激发下漂白速度更快,如何在信号强度与光漂白之间找到平衡,需要实验者根据自己的样品条件反复调试。
另一个容易被忽视的问题是,市面上很多滤光片套装通常不含CY7通道,如果实验室没有配备对应的激发发射滤片,可能需要额外购置。
使用Berberamine-CY7时,孵育时间不宜过长。近红外花菁染料虽然水溶性比CY5稍好,但长时间在水相中静置仍可能发生聚集,建议孵育后及时洗涤并成像。如果需要多次重复观察,样品应避光4℃保存,但保存时间也不宜超过一周。
设置对照时,除了空白对照,建议加一个游离CY7染料对照组,因为游离CY7本身是脂溶性的,可能在脂质富集区域产生非特异性信号,这一点需要在结果解读时格外注意。
本文仅从实验技术角度对近红外荧光探针的使用特点进行讨论,供相关领域研究者参考交流,产品禁止用于任何人体试验。
点击链接,查看产品详情:小檗胺-CY7
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