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2026年04月25日 14:44 来源：
Sulfo-CY5.5-NH₂是 “反向标记” 的利器，专门解决羧基分子（如蛋白、纳米材料）无法用传统 NHS 酯标记的难题，凭借氨基活性与水溶性优势，成为羧基靶向标记的首选。
核心应用与操作方法
1. 羧基蛋白标记（EDC/NHS 法）
· 准备：目标蛋白（含羧基）用 0.1 M MES 缓冲液（pH 5.5）透析，去除杂质；Sulfo-CY5.5-NH₂用 MES 配制成 1 mM 储备液。
· 活化：加入 EDC 与 NHS（摩尔比 1:1:1.5），室温活化 15 分钟，激活蛋白羧基。
· 偶联：加入 Sulfo-CY5.5-NH₂，染料与蛋白摩尔比 8–12:1，室温避光反应 2 小时。
· 纯化：透析去除未反应染料，4℃避光保存标记产物。
1. 纳米材料标记（还原胺化法）
· 准备：羧基修饰的纳米颗粒（如脂质体、量子点）用 PBS 洗涤，分散至浓度 1 mg/mL；Sulfo-CY5.5-NH₂用 PBS 稀释至 50 μM。
· 反应：加入染料与氰基硼氢化钠（终浓度 10 mM），室温避光反应 4–6 小时，实现氨基与羧基的还原胺化偶联。
· 纯化：离心或过滤洗涤纳米颗粒，去除游离染料，得到荧光标记纳米材料。
1. 小分子羧基标记
· 直接将 Sulfo-CY5.5-NH₂与羧基小分子按 1:1.2 摩尔比混合，在缩合剂（如 HATU、DCC）存在下反应，生成稳定酰胺键，用于小分子荧光示踪。
解决的科研难题
· 标记方向局限：传统 NHS 酯只能标记氨基分子，Sulfo-CY5.5-NH₂反向标记羧基分子，拓展标记范围，覆盖更多生物分子与材料。
· 水溶性差问题：磺酸基团让染料在水相体系中稳定分散，无需有机溶剂，避免纳米材料聚集与蛋白变性。
· 反应条件苛刻：氨基与羧基偶联条件温和，室温即可进行，不破坏样本结构与活性，适配敏感样品。
· 非特异性吸附：分子带负电，降低与生物样本的非特异性结合，成像背景更干净，信噪比更高。
使用避坑指南
· 控制 pH：EDC 活化需在 pH 5.0–6.0 进行，还原胺化 pH 6.0–7.0 最佳，避免 pH 过高导致副反应。
· 现配现用：EDC 易水解，活化后尽快加入染料；还原胺化反应需持续避光，减少荧光损失。
· 比例优化：根据目标分子大小调整染料比例，避免过度标记导致活性损失或荧光淬灭。
Sulfo-CY5.5-NH₂凭借独特的氨基活性与水溶性，成为羧基分子与材料标记的核心工具，让反向标记实验变得简单高效，助力科研人员突破标记局限，探索更多未知领域。
限科学研究使用，严格禁止用于人体实验、临床诊断、临床治疗及其他非科研用途。新维创生物相关试剂均遵循科研用途标准生产与质检。
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