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2026年04月22日 14:53 来源:
一、产品核心定位
连翘脂素 - 生物素是天然产物靶点研究的 “亲和捕捉工具”,专门解决连翘脂素靶点难以鉴定的问题。它通过生物素与链霉亲和素的超强结合力,能像 “磁铁” 一样,从复杂的生物样本中精准 “抓出” 与连翘脂素结合的蛋白,让你快速锁定研究靶点,为后续机制研究奠定基础。
1. 试剂与样本制备:
o 试剂:将连翘脂素 - 生物素溶于 DMSO,配成 1 mM 储备液,-20℃避光保存;
o 样本:收集培养的细胞,用预冷 PBS 洗涤 2 次,加入含蛋白酶抑制剂的裂解液,冰上裂解 30 分钟,4℃、12000 rpm 离心 15 分钟,取上清作为蛋白样本。
2. 结合与捕获反应:向蛋白样本中加入试剂工作液(终浓度 1-10 μM),4℃避光孵育 2-4 小时,让试剂与靶点蛋白充分结合。随后加入链霉亲和素磁珠,4℃继续孵育 1 小时,期间轻柔混匀,确保磁珠充分捕获复合物。
3. 洗涤与洗脱:用含 0.1% Tween-20 的 PBS 洗涤磁珠 5 次,每次 5 分钟,去除非特异性结合蛋白。最后加入洗脱液(如 8 M 尿素),室温孵育 10 分钟,洗脱结合的靶点蛋白,用于后续 Western blot 或质谱鉴定。
· 蛋白样本预处理:裂解时需添加蛋白酶抑制剂,防止蛋白降解;样本浓度控制在 1-5 mg/mL,过低影响捕获效率,过高易产生非特异性结合。
· 孵育温度与时间:4℃孵育可降低非特异性吸附,孵育时间需充足,确保结合反应完全,避免因时间不足导致靶点丢失。
· 磁珠用量:根据蛋白样本量调整磁珠用量,一般每 1 mg 蛋白加入 10-20 μL 磁珠,过量磁珠会增加背景干扰。
除靶点捕获外,该试剂还可用于连翘脂素的分子相互作用验证 —— 通过 SPR 技术实时监测结合动力学,计算结合常数;也可用于中药复方中连翘脂素活性的评价,对比不同提取工艺下连翘脂素的靶点结合能力。它是连接天然产物与分子机制研究的桥梁,为中药现代化研究提供了可靠的技术手段。
限科学研究使用,严格禁止用于人体实验、临床诊断、临床治疗及其他非科研用途。新维创生物相关试剂均遵循科研用途标准生产与质检。
点击可查看相关产品详情:连翘脂素-生物素
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