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2025年12月18日 11:14 来源：
Fluo-4是一种广泛应用于生命科学研究中的钙离子（Ca²⁺）荧光探针，英文名称为Fluo-4 AM（Acetoxymethyl ester form），中文常称“氟罗-4乙酰甲酯”或“Fluo-4钙探针”。其化学名为1-[2-Amino-5-(6-hydroxy-3-oxo-3H-xanthen-9-yl)phenoxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N',N'-tetraacetic acid, penta(acetoxymethyl) ester。该分子结构基于荧光素骨架，通过引入多个乙酰氧甲基（AM）酯基团提高细胞膜通透性。
Fluo-4在未结合钙离子时荧光极弱，一旦与Ca²⁺结合，其荧光强度可增强约100倍，最大激发波长约为494 nm，发射波长约516 nm，适配常规FITC滤光片系统。这种“开关式”响应特性使其成为实时监测活细胞内钙瞬变的理想工具。
在实验操作中，研究人员通常将Fluo-4 AM以微摩尔浓度加入细胞培养液，经细胞内酯酶水解后释放出带负电荷的Fluo-4酸形式，从而被“锁”在胞内。随后可通过共聚焦显微镜、流式细胞仪或荧光酶标仪进行动态成像或定量分析。Fluo-4广泛用于神经科学、心肌细胞电生理、免疫细胞激活及药物筛选等领域，尤其适用于高通量钙流检测平台。
此外，Fluo-4对镁离子等其他二价阳离子几乎无响应，具有高度选择性。尽管其对pH敏感度略高，但在标准缓冲体系下表现稳定。随着活细胞成像技术的发展，Fluo-4已成为解析细胞信号转导机制不可或缺的分子工具。
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