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2025年11月15日 11:38 来源:
1.材料中英文名称
中文名称: CY2-炔烃化合物 或 花菁染料CY2-炔基
2.两个部分的功能作用
同样,我们需要分别理解CY2和Alkyne的功能。
CY2 部分:荧光报告基团
生理功能: 无内在生理功能,是合成荧光染料。
实验应用中的功能:
荧光标记与示踪: CY2作为绿色荧光基团,在~492 nm光激发下发射~510 nm的绿光。其核心作用是提供荧光信号,用于检测、定位和定量目标分子。
应用场景: 广泛应用于荧光显微镜、流式细胞术、Western Blot成像等。
Alkyne(炔烃)部分:生物正交反应手柄
生理功能: 末端炔烃在天然生物分子中几乎不存在,因此本身无生理功能。
实验应用中的功能:
点击化学: 这个末端炔烃基团是另一个关键的“点击化学”手柄。它可以与叠氮化合物 在铜催化剂的存在下发生经典的铜催化的叠氮-炔环加成反应。
功能作用: Alkyne在这里充当一个“化学钩子”,允许研究人员将CY2荧光染料特异性地连接到任何带有叠氮基团的靶分子上。
3. 生理特性
主要指其在生物实验环境下的表现:
光谱特性:
激发波长: 约 492 nm
发射波长: 约 510 nm
颜色: 绿色荧光。
光稳定性: 中等,长时间强光照射下荧光信号会衰减。
水溶性: 商业化的CY2-Alkyne通常会进行改性(如引入磺酸根)以增强其水溶性,便于在生理缓冲液中使用。
关于铜催化剂: 这是使用CY2-Alkyne时的一个关键点。其与叠氮的反应需要Cu(I) 作为催化剂。Cu(I)对活细胞有毒性,因此这种标记方法通常不适用于活细胞内部的标记,更多用于固定化细胞、体外蛋白质标记或细胞表面标记(在特定条件下)。
4. 两个材料是如何构建组合在一起的?
CY2染料和末端炔烃基团是通过有机合成方法共价连接在一起的。
合成化学家会设计一个分子“桥梁”(称为连接臂),一端与CY2染料相连,另一端则带有末端炔烃。
典型的合成路径如下:
准备CY2核心: 合成或购买带有活性官能团的CY2染料。这个官能团通常是一个羧基 或一个氨基。
准备炔烃连接臂: 准备一个含有两个官能团的连接臂分子,其中一个官能团能与CY2反应,另一个则是末端炔烃。例如,戊炔酸就是一个常用的连接臂,它同时拥有一个羧基和一个末端炔烃。
偶联反应:
如果CY2带氨基: 将CY2-NH₂与戊炔酸的羧基进行酰胺化反应,生成CY2-酰胺-炔烃。
如果CY2带羧基: 将CY2-COOH与一个带氨基的炔烃(如炔丙胺)进行酰胺化反应,同样生成CY2-酰胺-炔烃。
纯化: 对反应产物进行纯化,得到高纯度的最终产品——CY2-Alkyne。
最终分子的结构可以表示为:CY2 — [连接臂,例如酰胺键] — C≡CH
总结与应用流程图
CY2-Alkyne 是一个将绿色荧光信号(CY2) 和点击化学连接能力(Alkyne) 整合在一起的强大工具。
典型的实验应用流程(与CY2-N3互补):
代谢标记或化学修饰: 让细胞摄取带有叠氮基团(-N₃)的代谢前体(如叠氮糖),或将目标生物分子(如蛋白质、抗体)用叠氮基团进行修饰。
固定与透化(如为细胞内靶点): 如果是标记细胞内的蛋白质,通常需要将细胞固定并透化。
点击反应标记:
将CY2-Alkyne 与Cu(I)催化剂 一起加入到样品中。
Alkyne与预先引入的叠氮基团发生高效的点击反应,形成稳定的三唑环,从而将CY2荧光团共价连接到目标分子上。
洗涤与成像: 洗去未反应的CY2-Alkyne和催化剂,然后在荧光显微镜下观察绿色荧光,即可定位目标分子。
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